[发明专利]一种新的多肽——Symplekin23.54和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——Symplekin23.54，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

紧密连接是分子内连接类型中的一种基本类型，主要存在于极化上皮细胞之间和一定的内皮细胞之间。紧密连接可阻止可溶性物质从上皮细胞层一侧扩散到另一侧，因此起重要的封闭作用，同时还将上皮细胞的游离端与基底面细胞质膜上的膜蛋白相互隔离，以行使其各自不同的膜功能，此外还限制膜脂和膜蛋白的融合，因此紧密连接除了封闭作用外，还具有隔离和一定的支持功能[Gumbiner，B.1993.J.Cell Biol.123：1631-1633][Hirsch，M.，andW.Noske.1993.Micron.24：325-352]。电镜观察显示，紧密连接处的相邻的细胞质膜紧紧地靠在一起，没有间隙，似乎融合在一起。冰冻断裂复型技术显示出它是由围绕在细胞周围的焊接线网络而成。焊接线也称嵴线，一般认为它由成串排列的特殊跨膜蛋白组成，相邻细胞的嵴线相互交联封闭了细胞之间的空隙。将含有重金属元素的化合物溶液注入胰腺腺细胞的一侧，电镜显示，它不能通过细胞间的紧密连接。有些上皮细胞间的紧密连接甚至可阻止水分子通过。

生物学家新发现了一种分子量为126.5kD的多肽蛋白质，symplekin蛋白。该蛋白是与极性上皮细胞(非血管上皮)和精巢足底细胞紧密连接相关的密闭小带斑点的特异组成成分。Symplekin蛋白无论是氨基酸顺序还是在分子内的分布都与其他紧密连接相关蛋白有显著的不同，它比ZO-1蛋白表现出了对紧密连接更大的特异性，因此到目前为止它被广泛地当作“紧密连接标记”。免疫实验发现，在结肠癌和腺癌病人中，symplekin蛋白集合在紧密连接相关斑点结构，与在正常极化上皮细胞中的位置相似。因此，symplekin蛋白可以作为肿瘤分化诊断的分化标记。实际上，symplekin蛋白除了表达于被紧密连接相连的或可能形成密闭小带斑点的细胞以外还广泛表达于缺乏紧密连接或一般稳定细胞连接的其他细胞和组织。与其他紧密结合相关蛋白一样，symplekin蛋白是许多不同种类细胞的持家蛋白[Brigitte H.Kion，Stephan Schafer，Caecilia Kuhn，ChrestineGrund，and Werner W.

Franks J.Cell.Biol.134(4)，1003-1018(1996)]。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与Symplekin的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为Symplekin23.54。

由于如上所述Symplekin23.54蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的Symplekin23.54蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新Symplekin23.54蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——Symplekin23.54以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码Symplekin23.54的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码Symplekin23.54的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产Symplekin23.54的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——Symplekin23.54的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——Symplekin23.54的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与Symplekin23.54异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：