[发明专利]一种新的多肽——人的线粒体翻译起始因子IF－2mt35.97和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在原核生物和真核生物的细胞中，蛋白质的生物合成的起始已经被广泛的研究过。在起始过程中，在依赖GTP的行为中，起始因子2(IF-2)促进起始因子tRNA同小的核糖体亚基的结合。原核生物的IF-2是一个分子量为78000-97000的单多肽链。在依赖mRNA的行为中，它促进FMet-tRNA结合30S的核糖体亚基。真核生物的IF-2是一个分子量为145000的三聚体蛋白(Pain，V.M，1986，Biochem.J.235，625-637)。它负责Met-tRNA结合40S亚基。

最近我们发现了一个新的人的线粒体翻译起始因子2(IF-2mt)。它的mRNA含有一个270个碱基对的5′未翻译前导序列。它含有三个ATG三联体，都是位于框外，它同IF-2mt起始密码子相关。每一个ATG标记短的上游开放阅读框架(uORF)的开始。实验表明，uORF强烈的抑制蛋白质编码序列的上游的翻译(Hinnebusch，a.g.，1990，Trends Biochem.Sci.15，148-152)，IF-2mt开放阅读框架的翻译被这些uORF的存在而下调。它有一个2181个碱基对的开放阅读框架，编码727个氨基酸蛋白。IF-2mt的翻译起始密码子是AUG。它还含有一个超过60个残基的聚酰胺信号。

大多数的线粒体蛋白质在细胞质中是以前体的形式被合成的。大多数的前体携带氨基末端的前序列，它含有定位于线粒体中的信息。线粒体蛋白的前序列富含带正电的残基，缺乏酸性残基，大多数含有羟基化残基。从氨基末端开始的人的肝的IF-2mt 30个氨基酸含有基础性的残基，包括两个亮氨酸，四个精氨酸，两个羟基氨酸。

实验表明，人的IF-2mt的成熟形式的多肽序列同2/3的原核生物的IF-2s的羧基末端有广泛的同源性。存在IF-2的G区域中的选择性的β平板/α螺旋二级结构保留在IF-2的中心区域。在进化过程中，IF-2的G区域是高度保守的。

在心脏，肝脏，骨骼肌肉和肾脏中都有丰富的IF-2mt的转录水平，同时在脑，前列腺，脾脏，肺有低水平的IF-2mtmRNA。

人的IF-2mt同蛋白质的翻译的起始有关，如果表达异常或突变，将影响蛋白的翻译，最终影响蛋白质的合成，从而导致相关性疾病的发生。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％ FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人的线粒体翻译起始因子IF-2mt的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97。

由于如上所述人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人的线粒体翻译起始因子IF-2mt 35.97异常相关的疾病的方法。