[发明专利]一种新的多肽——人铁硫蛋白9.9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人铁硫蛋白9.9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

线粒体呼吸链由四个寡聚蛋白复合体组成，这些寡聚蛋白复合体按照一定的顺序组成一条呼吸链，这条呼吸链从各种不同的底物得到电子，再将电子运至分子氧。其中一个寡聚蛋白复合体叫泛素-细胞色素C还原酶(bcl复合体)。这种广泛存在酶的基本特征无论在动物，还是在植物线粒体，叶绿体和细菌光合链以及一些需氧细菌呼吸链中都是保守的。泛素-细胞色素C还原酶位于线粒体内膜，催化电子从质体醌到细胞色素C。它催化泛素和细胞色素C的氧化还原反应，与植物叶绿体和蓝细菌质体醌—质体蓝素还原酶功能相似，并且同时也催化质体醌和细胞色素F的氧化还原反应。

电子传递系统的成分之一是一个有一个2铁-2硫束的铁硫蛋白，这个铁硫蛋白就是Rieske氏铁硫蛋白。Rieske氏铁硫蛋白大约包括190个氨基酸残基，其铁硫束通过半胱氨酸残基和组氨酸残基络合。大约128位到152位的氨基酸残基形成一个大的loop环。最可能完成与铁配基结合的是半胱氨酸129，134，148和组氨酸151。loop环的后面是3个短的β片层和1个α转角，从而形成一个部分的围绕铁原子结合口袋的β桶状序列。Rieske氏铁硫蛋白有两个非常保守的区域，它们包含了所有结合铁硫束的氨基酸残基。这两个保守区域都有两个半胱氨酸和一个组氨酸。第一个半胱氨酸和组氨酸是2铁-2硫的配基，而剩下的半胱氨酸则形成一个二硫键。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人铁硫蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人铁硫蛋白9.9。

由于如上所述人铁硫蛋白9.9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人铁硫蛋白9.9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人铁硫蛋白9.9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人铁硫蛋白9.9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人铁硫蛋白9.9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人铁硫蛋白9.9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人铁硫蛋白9.9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人铁硫蛋白9.9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人铁硫蛋白9.9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人铁硫蛋白9.9异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中230-502位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1331位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人铁硫蛋白9.9蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。