[发明专利]一种新的多肽——人多铜氧化酶9.57和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人多铜氧化酶9.57，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

多铜氧化酶是一种具有三个光谱各异的铜中心的酶(Messerschmidt A.，HuberR.，Eur.J.Biochem.187：341-352(1990)；Ouzounis C.，Sander C.，FEBS Lett.279：73-78(199))。这些中心包括：1型(或蓝型)，2型(或常规型)以及3型(或是偶联的双核型)。在人体中，血浆铜蓝蛋白(亚铁氧化酶)是该家族的成员，该蛋白存在于血清中，它氧化多种无机和有机物质。血浆铜蓝蛋白在结构上具有内在的序列同源性，是从与漆酶及抗坏血酸氧化酶相似的铜结合域三份复制进化而来；凝血因子V(Fa V)；凝血因子VIII(Fa VIII)也是多铜氧化酶家族成员。凝血因子V及VIII是血液凝固的辅因子，它们的结构相似(Mann K.G.，Jenny R.J.，KrishnaswamyS.，Annu.Rev.Biochem.57：915-956(1988))，它们的序列由一个三次重复的A域，一个B域以及一个两次重复的C域构成，顺序如下：A-A-B-A-C-C，A-型域与多铜氧化酶相关。

多铜氧化酶家族具有两类特征序列模板，都源自同一个区域，其中含有五个参与铜中心结合的残基。第一类模板为G-x-[FYW]-x-[LIVMFYW]-x-[CST]-x(8)-G-[LM]-x(3)-[LIVMFYW]，其中不含有与铜结合的残基，例如在Fa V及Fa VIII中丧失了结合铜能力的区域；第二类模板则对铜结合域是特异的：H-C-H-x(3)-H-x(3)-[AG]-[LM]，前两个H是3型结合残基，一个C，第三个H以及L或M是1型铜配体，这一模板是结合铜区域所特有的。

本发明的多肽含有上述两类特征序列，且具有相似的生物功能，故而被认为是多铜氧化酶家族的新成员，命名为人多铜氧化酶9.57。该多肽及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可用于诊断兼防治与氧化无机与有机物质有关的疾病以及与凝血机制有关的疾病，如血友病等。

由于如上所述人多铜氧化酶9.57蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人多铜氧化酶9.57蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人多铜氧化酶9.57蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人多铜氧化酶9.57以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人多铜氧化酶9.57的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人多铜氧化酶9.57的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人多铜氧化酶9.57的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人多铜氧化酶9.57的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人多铜氧化酶9.57的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人多铜氧化酶9.57异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中756-1019位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1860位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。