[发明专利]一种新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白12.32和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白12.32，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

ProT-alpha蛋白广泛地分布在哺乳动物细胞中，是一种小的(109-110个氨基酸残基)、酸性的细胞核蛋白，与哺乳动物细胞的增殖和生存密切相关。ProT-alpha蛋白只存在于哺乳动物细胞中，而且能够大量地表达，其结构基本不发生折叠，在所有的组织细胞中，它都以完整的形式定位于核中。ProT-alpha是一种高度酸性的蛋白，在以前它被认为是一种胸腺因子，在T淋巴细胞成熟过程中起着激素调节作用，然而，进一步的分子和细胞水平上的分析显示它是一种核蛋白，是细胞增殖所必需的。ProT-alpha蛋白能够改变染色质的浓缩状态，通过它与His1的共同作用介导染色质丝形成非折叠状态。另外，ProT-alpha蛋白还发现与细胞的凋亡有关，是细胞死亡和肿瘤生长的调节器(Segade F，Gomez-Marquez J，1999)。

当静止细胞增殖时，ProT-alpha的mRNA的量增加到其原来水平的10倍以上，接着产生ProT-alpha蛋白，它的表达与其它的细胞生长相关分子(如Myc、His H3和增殖细胞的核抗原)在时序上是相伴随的。最引人注目的证明来自同步的人类骨髓瘤细胞，它一旦暴露到反义寡聚脱氧核苷酸，在一些位点上直接靠近ProT-alpha的mRNA，紧接着生长受到限制。在体外，ProT-alpha蛋白能够结合到人免疫缺陷病毒蛋白rev和人T细胞白血病蛋白rex的活性区域(Kubota et al.)，rev涉及将不完全切割的病毒RNA从细胞核的输出，因此ProT-alpha可能与正常细胞中的rev类似蛋白相互作用，协助哺乳动物细胞的RNA或者蛋白从细胞核中的输出。

ProT-alpha是一种很小的蛋白，其的氨基酸序列是比较独特的，除了一个在其它的核蛋白中也存在的较为典型的核定位信号以外，它还含有一个含有重复Glu残基区域，也能够在Xenopus染色质改造蛋白(一种核质蛋白)中找到。在ProT-alpha上，发现有若个tRNA附着位点，因此tRNA与它的结合是选择性可变更的。ProT-alpha蛋白与核质蛋白有很明显的同源性，在体外它们都能够与His相互作用(Papamarcaki，T.and Tsolas，O.，1994；Diaz-Jullien，C.，Pérez-Estévez，A.et al.，1996)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与细胞凋亡相关蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人细胞凋亡相关蛋白12.32。

由于如上所述人细胞凋亡相关蛋白12.32蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人细胞凋亡相关蛋白12.32蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人细胞凋亡相关蛋白12.32蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白12.32以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人细胞凋亡相关蛋白12.32的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人细胞凋亡相关蛋白12.32的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人细胞凋亡相关蛋白12.32的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人细胞凋亡相关蛋白12.32的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人细胞凋亡相关蛋白12.32的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人细胞凋亡相关蛋白12.32异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；