[发明专利]一种新的多肽——人层粘连蛋白B2链15.95和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人层粘连蛋白B2链15.95，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

层粘连蛋白是一种多区域蛋白，它是主要的基底膜非胶原成分，存在于所有的基底膜中并与基底膜其他的主要成分诸如巢蛋白，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖或是胶原蛋白IV络合(Timpl，R.(1989)Eur.J.Biochem.180；487 to 502)。它由三条不同的二硫键连接的多肽构成，这赋予层粘连蛋白以非对称的交联结构，含有8个不同的装配亚基。为了获得一种层粘连蛋白的同种型，三种不同分子类型的多肽必须始终装配在一起：一条alpha链(亦称为A链)，一条beta链(亦称为B1链)以及一条gamma链(亦称为B2链)(Burgeson，R.E.；et al.(1994)Matrix Biology，Vol.14，209 to 211)。层粘连蛋白与多种有趣的生物功能有关，诸如对细胞生长，细胞扩散以及轴突生长产生影响，并且诱导分化过程(Timpl，R.(1989)Eur.J.Biochem.180；487 to 502)。尽管层粘连蛋白是所有基底膜的典型成分，但不同的同种型所具有的不同特征是它们有十分特异的组织分布。例如，分区蛋白(＝层粘连蛋白2；alpha 2，beta 1，gamma 1)是神经膜细胞，横纹肌以及营养细胞基底膜的一种组分(Leivo，I.；Engvall，E.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85；1544 to 1548)。另一种类型，s-层粘连蛋白(＝层粘连蛋白3；alpha 1，beta 2，gamma 1)存在于神经肌肉末梢板突触的基底膜中，血管内皮中以及肾小球足细胞中(Hunter，D.D.；Shah，V.；Merlie，J.P.；Sanes，J.R.(1989)Nature 338；229 to 234)。第三种类型，K-层粘连蛋白(层粘连蛋白6；alpha 3，beta 1/beta 2，gamma 1)对于皮肤基底膜是特异性的(Marinkovich，M.P.；Lunst rom，G.P.；Burgeson，R.E.(1992a)J.Biol.Chem.267；17900 to 17906)。缰蛋白(层粘连蛋白5，alpha3，beta 3，gamma2)是上皮组织的典型成分也是锚定蛋白丝的成分(Marinkovich，M.P.；Lunst rom，G.P.；Keene，D.R.，Burgeson，R.E.(1992b)J.Cell.Biol.119；695 to 703)。

层粘连蛋白B2链由含有螺旋结构，半胱氨酸多次重复以及球域的不同区域构成。与层粘连蛋白B1链相比，B1链的alpha域以及beta域在B2链中没有对等的部分，且B2中的半胱氨酸多次重复的数目为12，比B1链中少1个。B1链与B2链是高度同源的蛋白，在含有半胱氨酸重复域III及V中有40％残基相对应，它们是相关基因的产物。B2链基因的开放阅读框编码33各残基的信号肽。B2链的域I/II与B1链相似，也含有七次重复的卷曲螺旋结构，B1，B2链以此相连并与A链形成螺旋结构。B2链的域III，V域通过特异性受体结合于膜表面有关，多数促使细胞增殖及迁移的蛋白都含有该区域(Pikkarainen T，Kallunki T，Tryggvason K，J Biol Chem 1988 May 15；263(14)：6751-8)。

人血清中探测性层粘连蛋白的特异鉴定法可用于诊断各种疾病：肝纤维样变性/肝硬变，酒精肝纤维样变性，基础代谢的糖尿病并发症，肾病，慢性炎症关结病/慢性多重关节炎以及肿瘤疾病(Kropf.J.；et al.(1991)Clin Chem.37；30；Niemela，O.；Risteli，L.；Sotaniemi，E.A.；Ristelli，J.(1985)Eur.J.Clin.Invest.15；132 to 137；Katayama，M.；Kamihagi，K.；Hirai，S.；Murakami，K.；Hino，F.；Kate，I.(1992)Br.J.Cancer 65；509 to 514；Brocks，D.G.；Strecker，H.；Neubauer，H.P.；Timpl，R.(1986)Clin.Chem.32；787to 791；Horikoshi，S.；Koide，H.(1991)Clin.Chim.Acta 196；185 to 192)。