[发明专利]一种新的多肽——S－腺苷甲硫氨酸合成酶14.08和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

S-腺苷甲硫氨酸合成酶(Ado-Met-synt)是一种酶，它能催化甲硫氨酸和ATP合成S-腺苷甲硫氨酸(Ado-Met)和三磷酸盐(pppi)，并且也伴随着将pppi水解为ppi和pi，对于正常的细胞功能的发挥起着非常重要的作用，同时ATP和pppi能防止酶的失活。S-腺苷甲硫氨酸是转甲基作用的重要甲基供给者，也是多胺生物合成中丙胺的供给者。

在细菌中，S-腺苷甲硫氨酸合成酶只有一个单一的对碘氧基苯甲醚(基因metK)，在发育的酵母中有两个(分别为基因SAM1和SAM2)，而在植物以及哺乳动物中通常包含了一个多基因家族，S-腺苷甲硫氨酸合成酶家族的序列是较为保守的，较为典型的有两段高度保守的氨基酸序列，第一段是一个六肽结构，即为ATP结合序列：Gly-Xaa-Gly-Xaa-Gly和Lys残基；另一段是最为保守的，它是一个九肽结构，富含Gly。除了大肠杆菌中该酶的ATP结合位点以外，其它的合成酶都非常保守。S-腺苷甲硫氨酸合成酶在不同的种之间几乎有相同的氨基酸残基数。

S-腺苷甲硫氨酸合成酶包含四个完全相同的亚基，每两个亚基相结合形成一个球状的二聚物，每个二聚物有两个活性位点，位于两个亚基的中间，通过该酶使ATP水解为ADP和Pi，反应过程中K+和Mg2+是必不可少的金属离子。结合了ADP后的酶的构象几乎不发生改变，处于活性位点的Arg对于从ATP中分离出pppi以及pppi在活性位点的定位非常重要。

在哺乳动物体内，存在两种形式的S-腺苷甲硫氨酸合成酶，即肝特异性和非肝特异性(通常指肾)合成酶。进行Northern blot分析表明：正常的肝只表达肝特异性S-腺苷甲硫氨酸合成酶活性，而HepG 2细胞和HuH-7细胞只表达非特异性S-腺苷甲硫氨酸合成酶活性，肝特异性S-腺苷甲硫氨酸合成酶的缺少不是因为缺少基因，而是基因转录缺陷。进行肝和肾特异性S-腺苷甲硫氨酸合成酶的引物的反转录聚合酶链反应(PT-PCR)表明：在HepG2，HuH-7，Hep3B和HuH-1细胞以及四种相关的肝细胞癌(HCC)样品中，只表达肾特异性S-腺苷甲硫氨酸合成酶活性。由此可见，S-腺苷甲硫氨酸合成酶在肝癌的治疗上有非常重要的应用价值。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与S-腺苷甲硫氨酸合成酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08。

由于如上所述S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。 

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与S-腺苷甲硫氨酸合成酶14.08异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：