[发明专利]一种新的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2－9.9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

纤溶酶原激活物(PA)是激活纤溶物系统的丝氨酸蛋白水解酶。它们把非活性的纤溶酶原转化为活性的纤溶酶，后者降解血纤蛋白及血纤蛋白原。在人体内有两种纤溶酶原激活物，分别为组织纤溶酶原激活物(t-PA)以及与尿激酶相同的纤溶酶原激活物(u-PA)，u-PA由肾脏细胞与其他正常或恶性细胞产生。t-PA在防止血栓形成方面尤为重要。u-PA则防止尿道中血纤蛋白凝块的形成，并能够愈合创伤，在肿瘤性转化生长中也发现有u-PA存在。

PA的浓度及活性除了由PA合成来调控以外，还由抑制剂调控。现已知两种不抑制纤溶酶或其他蛋白水解酶的特异性纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)。一种由内皮细胞产生(PAI-1)，另一种在胎盘中发现(PAI-2)，也被称为“minactivin”。

纤溶酶原激活物抑制剂2(PAI-2)，是一种对尿型以及组织型的纤溶酶原激活物特异的丝氨酸蛋白水解酶抑制剂(serpin)，这是一种主要的巨噬细胞蛋白并在单核细胞及巨噬细胞生理学中起重要作用。研究发现人类巨噬细胞淋巴瘤细胞株能够由肿瘤启动子乙酸肉豆蔻佛波醇诱发，随后通过由类G蛋白分子激活磷脂酶C的信号来调节PAI-2基因转录暂时性增长50倍，从而强有效地刺激PAI-2的生物合成。因而巨噬细胞在一定条件下具有抑制纤溶酶原激活系统的功能主要是由PAI-2引起的。纤溶酶原激活物抑制剂2与肿瘤性转化生长有关，PAI-2及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可用于诊断，防治各种与肿瘤性转化有关的疾病，例如巨噬细胞淋巴瘤，早幼粒细胞淋巴瘤等(Wolf D.S.，Robert L.M.，et.，Mol.Cell.Biol.，7：4564，1987)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人纤溶酶原激活物抑制剂2的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9。

由于如上所述人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人纤溶酶原激活物抑制剂2-9.9异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中2101-2373位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2440位的序列。