[发明专利]一种新的多肽——人NF－E2相关因子13.2和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人NF-E2相关因子13.2，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

生物体内特定生理过程的完成需多种组织或发育阶段特异转录因子的调控来实现。如：转录调控因子NF-E2是胆色素原脱氨基酶基因细胞胞质内特异表达的重要调节因子。NF-E2在体内通过与一些特定的细胞胞类基因结合，以调控相关基因的转录与表达。NF-E2蛋白由P45及MafK两个亚单位组成。其中P45亚单位为CNC蛋白家族的成员，其蛋白序列中含有一亮氨酸拉链结构域，该结构域在CNC蛋白家族中高度保守的序列基序。在众多哺乳动物转录因子中均含有该结构基序，其可能是蛋白发挥正常生理学活性的重要活性中心。NF-E2蛋白的另一组成亚单位由小的Maf蛋白组成，这些蛋白均为原癌基因蛋白家族中的成员，其突变或表达异常可能与生物体内相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。

对各种转录调节因子NF-E2的结构进行研究发现，所有蛋白均具有相似的结构特征。其小Maf蛋白组成的亚单位中含有一识别DNA片段的结构基序，被称为Maf识别元素MARE，由如下保守的序列片段组成：TGCTGA(G/C)TCAGCA或TGCTGACGTCAGCA；另外，NF-E2蛋白的氨基酸序列中还含有如下所示的高度保守的序列片段：TGCTGA(G/C)TCA(T/C)，该序列片段蛋白与DNA结合的调节中心，调控着蛋白与DNA结合的活性。以上两个保守的序列片段在蛋白作用过程中协同作用，通过与特定的DNA结合来调节基因的转录与表达。该蛋白在B细胞及单细胞系中均有较高的表达量，其可能与免疫系统相关基因的表达相关。其表达异常可能将导致相关的免疫系统的作用异常，即引发各种相关的疾病。

1999年，Akira等人从人中克隆得到了一CNC蛋白家族的新成员，NF-E2相关因子3(Nrf3)。该基因编码一73KDa大的蛋白，是NF-E2蛋白的一新的组成成分，其氨基酸序列中亦含有CNC蛋白家族的高度保守的亮氨酸拉链结构域。该基因位于人染色体的7p14-15位点，与其它CNC蛋白家族的成员相似，这些蛋白均分布在HOX基因簇的附近。其在生物体内与NF-E2蛋白的其它功能单位协同作用，通过调控多种相关基因的转录与表达来调节生物体内多种重要的生理过程的进行[Akira Kobayashi，Etsuro Ito et al.，1999，J Biol Chem，274：6443-6452]。

由上可知，NF-E2相关因子3(Nrf3)作为CNC蛋白家族的新成员，与该家族的其它成员具有相似的结构特征，并具有相似的生理学功能。该蛋白在B细胞及各种单细胞系中均有较高的表达量，其可能在B细胞的发育及作用过程中起重要的调控作用。该蛋白的突变或表达异常将导致相关细胞的发育及作用异常，其通常与生物体内各种相关的免疫系统紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人NF-E2相关因子的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人NF-E2相关因子13.2。

由于如上所述人NF-E2相关因子13.2蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人NF-E2相关因子13.2蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人NF-E2相关因子13.2蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人NF-E2相关因子13.2以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人NF-E2相关因子13.2的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人NF-E2相关因子13.2的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人NF-E2相关因子13.2的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人NF-E2相关因子13.2的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人NF-E2相关因子13.2的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人NF-E2相关因子13.2异常相关的疾病的方法。