[发明专利]一种新的多肽——锌指蛋白9.13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——锌指蛋白9.13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可主要分为两类：含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白[Kamal Chowdhury，Heidi Rohdewohld etal.，NucleicAcids Research，1988，16：9995-10011]。

锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，锌指蛋白按其结构特征又可分为各种不同的家族。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种类型的锌指蛋白。果蝇Kruppel基因类似的锌指蛋白分布最为广泛，且在生物体内有着重要的生物学功能。这些基因均含有锌指蛋白的特征性连续重复的C2-H2锌指蛋白结构域。研究发现，这些蛋白与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病[Kamal Chowdhury，HeidiRohdewohld et al.，Nucleic Acids Research，1988，16：9995-10011]。

所有的锌指蛋白Kruppel家族的成员均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸残基位点为高度保守的。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同(锌指个数不同)则功能也不同。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。研究发现，许多锌指蛋白的锌指结构域相互连接区域也是高度保守的，这一区域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中组氨酸与半胱氨酸为金属离子的结合位点，而X为可变氨基酸残基。这一区域对于锌指结构的形成是必需的，指结构的数量将直接影响锌指蛋白与不同长度的DNA结合，且多指结构与复合物的结合稳定性有关[Jeremy M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与锌指蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为锌指蛋白9.13。

由于如上所述锌指蛋白9.13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的锌指蛋白9.13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新锌指蛋白9.13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——锌指蛋白9.13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码锌指蛋白9.13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码锌指蛋白9.13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产锌指蛋白9.13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——锌指蛋白9.13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——锌指蛋白9.13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与锌指蛋白9.13异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。