[发明专利]一种新的多肽——人亮氨酸拉链蛋白9.13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人亮氨酸拉链蛋白9.13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

染色体DNA结合蛋白负责DNA分子遗传信息的组织、复制和阅读。这些DNA结合蛋白可以分为两类：一是组蛋白，与DNA非特异性结合；另一类是非组蛋白，又称序列特异性DNA结合蛋白。

其中，非组蛋白的特点是：(1)能识别特异的DNA序列，识别的信息来源于DNA核苷酸序列本身，识别位点存在于DNA双螺旋的大沟部分；(2)识别与结合都靠氢键和离子键；(3)在不同的基因组之间，这些序列特异性结合蛋白所识别的DNA序列在进化上是保守的；(4)虽然与DNA特异序列结合的蛋白质在每个真核细胞中只有10000个分子左右，但却具有多方面的重要功能。

非组蛋白的功能包括：(1)帮助DNA分子的折叠，以形成不同的结构域，从而有利于DNA的复制和基因的转录；(2)协助启动DNA的复制；(3)控制基因转录，调节基因表达。

根据对迄今发现的众多DNA特异性结合蛋白的分析，发现它们可以分为不同的蛋白家族，与DNA结合的结构域，分别具有不同的结构模式，比如锌指模式(Zincfinger motif)、alpha螺旋-转角-alpha螺旋模式(helix-turn-helix motif)和亮氨酸拉链模式(Leucine zipper motif)。

亮氨酸拉链模式(Leucine zipper motif)是一类序列特异性DNA结合蛋白家族，比如，酵母的转录激活因子(GCN4)，癌蛋白Jun、Fos、Myc以及增强子结合蛋白等等。所有的这些蛋白都含有4个或5个亮氨酸残基，彼此之间精确的相距7个氨基酸残基。这样，在alpha螺旋的某一个侧面每两圈就出现一个Leu，这些Leu排成一排，两个蛋白质分子的alpha螺旋之间靠Leu残基之间的疏水作用力形成一条拉链。这类蛋白与DNA的特异结合都是以二聚体形式起作用的，但与DNA结合的结构域并没有被证明存在于拉链区中。

转录水平的基因调控是真核细胞基因调控的主要环节，因为转录起始及其发生的频率是基因表达调控环节中最基本的。在已发现的众多转录因子和其他基因调控蛋白中，DNA结合结构域大多在100个氨基酸以下，具有不同的结构模式，即如前所述的锌指模式、alpha螺旋-转角-alpha螺旋模式和亮氨酸拉链模式等等。

通过对受感染的人细胞的研究发现，疱疹病毒蛋白VP16可以结合于人的细胞增殖因子HCF。因此推测VP16在结构上模仿了人亮氨酸拉链蛋白(LZIP)，因此它可以调控细胞周期的进程。此外，在果蝇等生物中也发现，LZIP具有HCF结合功能，因此，LZIP-HCF的相互作用在后生动物进化过程中是保守的。(Genes Dev1997 Dec 1；11(23)：3122-7)

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人亮氨酸拉链蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人亮氨酸拉链蛋白9.13。

由于如上所述人亮氨酸拉链蛋白9.13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人亮氨酸拉链蛋白9.13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人亮氨酸拉链蛋白9.13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人亮氨酸拉链蛋白9.13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人亮氨酸拉链蛋白9.13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人亮氨酸拉链蛋白9.13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人亮氨酸拉链蛋白9.13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人亮氨酸拉链蛋白9.13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人亮氨酸拉链蛋白9.13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人亮氨酸拉链蛋白9.13异常相关的疾病的方法。