[发明专利]一种新的多肽——人蛋白内切酶9.35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人蛋白内切酶9.35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

蛋白内切酶Clp是一个蛋白二聚体，它包含一个水解蛋白的亚基(clpP)和两个相关的ATP结合调控亚基(clpA和clpX)之一。ClpP是一个丝氨酸蛋白酶，具有与胰凝乳蛋白酶相似的活性。它的酶催化活性位点是丝氨酸-111和组氨酸-136，这两个位点在不同来源的Clp酶中是高度保守的，可以用来鉴定某种蛋白是否属于Clp蛋白。

其保守的碱基序列是：T-x(2)-[LIVMF]-G-x-A-[SAC]-S-[MSA]-[PAG]-[STA](其中S是酶催化活性位点)和R-x(3)-[EAP]-x(3)-[LIVMFYT]-M-[LIVM]-H-Q-P(其中H是酶催化活性位点)

Clp的活性与细胞的不同生长状态有关。在对数生长期早期，Clp的活性较低，然而随着细胞的生长Clp的活性快速的增强，在对数生长期后期和进入早期稳定期的细胞中活性最高，然后又恢复最初的活性。这种活性的变化与Clp的Clp A组份活性有关，而与Clp P和Clp X的活性关系不大。蛋白内切酶Clp的功能是将蛋白切割成小的肽段，这一过程需要ATP与镁离子的参与。在没有ATP的情况下，只有短于5个残基的寡聚肽段才会被切割。蛋白内切酶Clp的另一个功能是充当分子伴娘。它介导蛋白插入细胞膜结构的过程、蛋白复合物的解聚或齐聚化的过程。蛋白内切酶Clp还可以修复由于不良环境的压力而被破坏的蛋白，以及活化Mu，λ以及P1 DNA复制所需的蛋白。这样看来，蛋白内切酶Clp不但可以水解蛋白，同时还在蛋白修复中起重要作用。如果此蛋白的活性失常将使细胞的蛋白修复功能受到影响。如果调控细胞周期的关键蛋白受到损伤而不能及时修复，那么细胞将有可能无限制的分裂增殖，最终导致癌症。

Clp蛋白对细胞的蛋白质平衡起重要的作用。蛋白水解酶的活性的降低会部分引起细胞中蛋白质浓度的升高会改变细胞的渗透压，引起细胞形状的改变，在泌尿系统中则引起各种泌尿系统的疾病，例如蛋白尿，血尿，水肿，尿毒症等。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人蛋白内切酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人蛋白内切酶9.35。

由于如上所述人蛋白内切酶9.35蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人蛋白内切酶9.35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人蛋白内切酶9.35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人蛋白内切酶9.35以及其片段、类似物和衍生物。 

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人蛋白内切酶9.35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人蛋白内切酶9.35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人蛋白内切酶9.35的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人蛋白内切酶9.35的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人蛋白内切酶9.35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人蛋白内切酶9.35异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中1027-1284位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1677位的序列。