[发明专利]一种新的多肽——人赖氨酰氧化酶54.45和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人赖氨酰氧化酶54.45，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

赖氨酰氧化酶(LOX)是位于细胞外的铜依赖酶，催化许多胶原质和弹性蛋白的交联反应。LOX催化胶原质和弹性蛋白前体的特定的肽酰赖氨酸和羟基赖氨酸ε-氨基的的氧化去氨基化。去氨基的赖氨酸可以形成醛交叉，从而将胶原质和弹性蛋白交联起来。与LOX结合的铜原子位于一个含有至少3个组氨酸配基的八面体复合物中。4个组氨酸残基在酶的中心区域形成一个簇。这一区域是与铜原子结合的区域，称为“铜爪”。这一区域可以用来作为LOX的特征性序列：

W-E-W-H-S-C-H-Q-H-Y-H

在3X-连锁隐性人类结缔组织病——皮肤松垂(IX型Ehlers-Danlos综合症)【Orig.Art.Ser.12(5)：293-298，1976】、Menkes综合症【Biochemistry 22：6156-6163，1983】和V型Ehlers-Danlos【Connect.Tissue Res.3：49-53，1975】中都发现了LOX活性的缺失。

在鼠动脉平滑肌细胞的核质中发现了LOX的活性。【Proc.Nat.Acad.Sci.94：12817-12822，1997.】可能LOX通过将核蛋白的肽酰赖氨酸氧化去氨基化，扰乱细胞核内核酸-蛋白相互作用而参与调节细胞核内的基因表达。LOX还有肿瘤抑制活性，是ras原癌基因的拮抗酶。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人赖氨酰氧化酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人赖氨酰氧化酶54.45。

由于如上所述人赖氨酰氧化酶54.45蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人赖氨酰氧化酶54.45蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人赖氨酰氧化酶54.45蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人赖氨酰氧化酶54.45以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人赖氨酰氧化酶54.45的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人赖氨酰氧化酶54.45的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人赖氨酰氧化酶54.45的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人赖氨酰氧化酶54.45的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人赖氨酰氧化酶54.45的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人赖氨酰氧化酶54.45异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中99-1586位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1854位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人赖氨酰氧化酶54.45蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。