[发明专利]一种新的多肽——核孔复合体10.67和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——核孔复合体10.67，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在真核细胞中，核质之间存在着连续而有选择性的双向物质交换，核孔复合体(NPC)是一种特殊的跨膜运输蛋白复合体，构成核质间双向运输的亲水性通道，包括两种运输方式，被动扩散和主动运输。核孔复合体主要由蛋白质组成，含有N-连接糖蛋白，起到稳定复合体结构的功能；还存在至少8-10种O-连接糖蛋白，构成了核孔蛋白家族(nucleoporin)，它们能够与麦胚凝集素(WGA)强烈亲合，它们背向核周隙，直接暴露于胞质和核质，可能这类糖蛋白即构成胞质和核质丝状物，直接参与核质物质交换。根据免疫交叉反应的事实，表明从酵母到人核孔蛋白有很强的同源性，核孔复合体整个结构在进化上是高度保守的。四种哺乳动物O-连接蛋白，迁移率分别为62、58、54、45KD，构成了p62复合体(Finlay et al.，1991；Kita et al.，1993)。核孔复合体的整个结构在进化上是高度保守的。

核孔复合体的功能主要是核质物质的交换，它是核质物质交换的双向选择性亲水通道。在真核细胞中，核质之间存在着连续而有选择性的双向物质交换，核孔复合体在功能上可被看作是一种特殊的跨膜运输蛋白复合体，构成核质间双向运输的亲水性通道。其运输方式主要有2种：被动扩散与主动运输。

hunp153蛋白是位于核孔复合体中的一种蛋白，包含了3个明显的区域。hunp153蛋白接近羧基末端区域与其它的核孔蛋白非常相似，与鼠的p62蛋白有23％的序列相似性，该区域包含了25拷贝的XFXFG五肽重复序列，富含Ser和Thr，占了氨基酸残基总数的32％。对于鼠的p62的研究发现，该分子区域包含了附加的O连接N-乙酰氨基葡糖残基位点。靠近氨基末端的区域包含7个附加的五肽重复序列。多肽的中间区域包含了4个重复序列，均为37-38个氨基酸残基数，每一个重复序列有2对Cys残基(CXXCXXXXXXXXXXcXXC)，该段序列非常接近于某些核酸结合蛋白的锌指结构域(Berg，J.M.，1986)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与核孔复合体的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为核孔复合体10.67。

由于如上所述核孔复合体10.67蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的核孔复合体10.67蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新核孔复合体10.67蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——核孔复合体10.67以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码核孔复合体10.67的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码核孔复合体10.67的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产核孔复合体10.67的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——核孔复合体10.67的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——核孔复合体10.67的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与核孔复合体10.67异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中223-516位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1021位的序列。