[发明专利]一种新的多肽——视网膜上皮膜蛋白46.42和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——视网膜上皮膜蛋白46.42，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

视网膜色素上皮细胞(RPE)形成了外周的血—视网膜屏障并且调节神经视网膜和脉络膜循环之间体液、离子和代谢物的向性移动[Adler，R.，andHewitt，A.T.(1994)inRetina(Ryan，S.J.，Ed.)，1857-1867，Mosby-Year，inc.，St.Loui s，MO]

。RPE和神经视网膜之间的密切联系在早期已经建立，它对维护光感受器的生存及发育能力是十分必要的[Bok，D.(1993)J.Cell Sci.Suppl.17，189-195]。视觉细胞的维护依赖糖酵解。不管白天黑夜，高代谢率的神经视网膜都在利用糖原，产生乳酸盐[Winkler，B.J.(1981)Gen.Physiol.77，667-692]。由于外周视网膜是无血管的，糖原的输入和乳酸盐的输出都靠RPE来完成。因为RPE在光感受器的内部空间调节乳酸盐的积蓄，所以它将影响到光感受器的代谢和发育能力[Adler，A.J.，and Southwick，R.E.(1 992)Ophthalmic Res.24，243-252]。

最近，我们在分化的鸡RPE细胞的基底膜上鉴定了一个完整的膜蛋白，该蛋白被称为视网膜上皮膜蛋白(REMP)。REMP只在鸡的RPE细胞中发现，而其他鸡组织比如神经视网膜、肠、肾脏或肝脏中都不存在[Philp，N.J.，et al.，1995Exp.Ete Res.59，679-688]。编码该蛋白的全长cDNA的氨基酸序列和最近克隆的单羧酸盐转运蛋白MCT1和MCT2有同源[Garcia，C.K.，et al.，1994 Cell76，865-873]，而且cDNA在FRTL-5细胞中的异种表达证实了REMP是一个质子偶联单羧酸盐转运蛋白，并确定为MCT3。

MCT3有一个1626bp长的开放阅读框，5’有一个446bp的未翻译区及3’有一个234bp的未翻译区，它有一个框内的终止密码子，位于起始密码子的6个碱基之前。MCT3和其他的转运蛋白一样，有12个跨膜区域，其中第6和第7个跨膜区域被一个长的胞质环隔开，其余的跨膜区域则被相对短的亲水片段隔开。氨基和羧基末端在膜的细胞质一边[Poole.R.C.，et al.，1996 Biochem.J.320，817-824]。尽管MCT3的结构和很多转运蛋白相似，它却只和单羧酸盐转运蛋白MCT1和MCT2有同源，同源率分别是43％和45％。

MCT3 cDNA翻译区一共有542个氨基酸长，在长的胞质环的亲水氨基酸延伸区有四个潜在的蛋白激酶C磷酸化位点和一个潜在的cAMP/cGMP依赖的磷酸化位点，另外在羧基末端还有两个蛋白激酶C磷酸化位点。在第9和第10个跨膜区域之间还有一个潜在的ASN相关的糖基化位点存在，但是在纯净的MCT3中并没有发现碳水化合物的存在。

本发明新的多肽与视网膜上皮膜蛋白在蛋白水平上有37％的同一性和54％的相似性，且具有相似的生物学功能和结构，因而被命名为视网膜上皮膜蛋白46.42。

由于如上所述视网膜上皮膜蛋白46.42蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的视网膜上皮膜蛋白46.42蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新视网膜上皮膜蛋白46.42蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——视网膜上皮膜蛋白46.42以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码视网膜上皮膜蛋白46.42的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码视网膜上皮膜蛋白46.42的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产视网膜上皮膜蛋白46.42的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——视网膜上皮膜蛋白46.42的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——视网膜上皮膜蛋白46.42的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与视网膜上皮膜蛋白46.42异常相关的疾病的方法。