[发明专利]一种新的多肽——人DNA复制因子C亚基8.91和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人DNA复制因子C亚基8.91，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

由DNA聚合酶I和DNA聚合酶II参与的DNA模板上引物的延长需要两种附加的蛋白，其一是细胞核增殖抗原，另一是激活剂1(A1)，又称为复制因子C(replication factor C)。A1是一种酶，包括了5个不同的亚基，它们的分子量分别是145Kd、40Kd、38Kd、37Kd和36.5Kd。A1能够选择性地结合到DNA引物的末端部位，与PDNA一起协同作为引物和polδ的识别因子起作用(Lee，S.-H.&Hurwitz，J.，1989；Tsurmoto，T.&Stillman，B.，1990)。A1增加了polδ和引物的亲和力，从而降低了活化polδ所需的PCDNA量。A1包含一种内在的DNA依赖的ATP酶活性，并且是polδ活化所必不可少的。

A1功能的发挥需要所有亚基的共同作用，每个亚基都行使着各不相同的功能。A1中37Kd和40Kd的亚基的氨基酸序列显示出高度的同源性，它们都包含了相似的ATP结合区域，它们都是发挥A1的生物学功能所必不可少的成分。但是，37Kd的亚基并不能够结合ATP，而40Kd的亚基有该项功能。采用多克隆抗体进行结合试验发现，当37Kd的蛋白结合上抗体后，部分抑制了DNA聚合酶δ参与的A1依赖的DNA合成反应(比正常情况降低了约50％)，当40Kd的蛋白也结合上了抗体之后，A1依赖的DNA合成比单一的37Kd亚基结合抗体受抑制程度更为强烈。这就证明了两种亚基与抗原的结合都能使A1依赖的DNA合成受到阻碍，但是它们在A1中所发挥的功能却不尽相同(Chen M，Pan ZQ，Hurwitz J，1992)。并且，与37Kd和40Kd亚基相对应的多克隆抗体并不会发生交叉反应，而是特异性相互作用。

我们还发现，37Kd以及40Kd两种亚基都与噬菌体的T4基因44蛋白同源，另外和大肠杆菌的DNA聚合酶III全酶的tau和gamma亚基也有一定的同源性。因此它们在DNA合成过程这发挥的生物学功能更是可见一斑。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人DNA复制因子C亚基的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人DNA复制因子C亚基8.91。

由于如上所述人DNA复制因子C亚基8.91蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人DNA复制因子C亚基8.91蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人DNA复制因子C亚基8.91蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人DNA复制因子C亚基8.91以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人DNA复制因子C亚基8.91的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人DNA复制因子C亚基8.91的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人DNA复制因子C亚基8.91的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人DNA复制因子C亚基8.91的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人DNA复制因子C亚基8.91的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人DNA复制因子C亚基8.91异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。