[发明专利]脂肪组织衍生的基质细胞的用途

权利要求书

1．一种用于使脂肪组织衍生的基质细胞分化成软骨细胞的培养基，它包括以化学方式确定的培养基，该培养基含有下列成分或用下列成分进行了补充：(ⅰ)能够激活可产生成熟软骨细胞表型的任何细胞转导途径的软骨诱导剂；(ⅱ)抗菌素；(ⅲ)营养补充剂诸如1-20％的胎牛血清或1-20％的马血清或任意其它生物或合成的等效蛋白质混合物；(ⅳ)抗坏血酸或相关的维生素C类似物以及(ⅴ)糖皮质激素或其它能够激活细胞糖皮质激素受体的化学剂。

2．权利要求1的培养基，其中所述的软骨诱导剂或基质细胞促细胞分裂剂分别或以混合方式选自下列物质组成的组：糖皮质激素；β-转化生长因子超家族中的一个成分；胶原胞外基质分子；和维生素A类似物。

3．权利要求1的培养基，其中所述的抗菌素是青霉素。

4．权利要求1的培养基，其中所述的抗菌素是链霉素。

5．权利要求3的培养基，其中所述的青霉素的浓度约为10单位/ml-约200单位/ml。

6．权利要求4的培养基，其中所述的链霉素的浓度约为10μg/ml-约200μg/ml。

7．权利要求2的培养基，其中所述的糖皮质激素是氢化可的松。

8．权利要求2的培养基，其中所述的糖皮质激素是地塞米松。

9．权利要求8的培养基，其中所述的地塞米松的浓度约为1nM-约100nM。

10．权利要求7的培养基，其中所述的氢化可的松的浓度约为1nM-约100nM。

11．权利要求2的培养基，其中所述的β-转化生长因子选自下列物质组成的组：骨形态发生蛋白-2、骨形态发生蛋白-4、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、IGF、PDGF、EGF、aFBF、bFBF、HGF、KGF、抑制素A和软骨形成刺激因子。

12．权利要求11的培养基，其中所述的β-转化生长因子的浓度约为1ng/ml-约100ng/ml。

13．根据权利要求11所述的培养基，进一步包括约1ng/ml-约10ng/ml浓度的TGF-β1。

14．权利要求2的培养基，其中所述的胶原胞外基质分子是胶原蛋白I。

15．权利要求2的培养基，其中所述的维生素A类似物是视黄酸。

16．权利要求15的培养基，其中所述的视黄酸的浓度约为0.1ng/ml-约1μg/ml。

17．一种用于使脂肪组织衍生的基质细胞分化成软骨细胞的方法，该方法包括下列步骤：

a)通过在500Xg将无菌试管内的50,000-5百万个细胞离心2-20分钟来沉淀所述的基质细胞，所述的无菌试管中含有一种培养基诸如Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)或α改进的极限必需培养基(αMEM)或Roswell ParkMemorial Institute培养基1640(RPMI培养基1640)；

b)以500-20,000个细胞/cm²的密度将所分离的基质细胞在分化培养基中铺平板；

c)用下列成分补充所述的培养基：

(ⅰ)能够激活可产生成熟软骨细胞表型的任何细胞信号转导途径的软骨诱导剂；

(ⅱ)抗菌素；

(ⅲ)用1-20％的胎牛血清或1-20％的马血清或任意其它生物或合成的等效蛋白质混合物补充的营养物；

(ⅳ)抗坏血酸或相关的维生素C类似物；

(ⅴ)糖皮质激素或能够激活细胞糖皮质激素受体的其它化学剂；以及

d)在一种具有5％CO₂和1％-20％氧气的培养箱中将所述的细胞在约31℃-37℃下培养约3-4周。

18．一种用于使脂肪组织衍生的基质细胞分化成软骨细胞的方法，该方法包括下列步骤：

a)在海藻酸钙或以三维构造支撑软骨形成的任意其它生物相容性晶格或基质中以50万-1千万个细胞/ml的浓度悬浮基质细胞；

b)将细胞转移至35mm培养皿中、并以500-20,000个细胞/cm²的密度将细胞在分化培养基中铺平板，该分化培养基中含有以化学方式确定的培养基，所述的培养基具有下列成分或用下列成分进行了补充：

(ⅰ)能够激活可产生成熟软骨细胞表型的任何细胞转导途径的软骨诱导剂；

(ⅱ)抗菌素；

(ⅲ)用1-20％的胎牛血清或1-20％的马血清或任意其它生物或合成的等效蛋白质混合物补充的营养物；

(ⅳ)抗坏血酸或相关的维生素C类似物；

(ⅴ)糖皮质激素或能够激活细胞糖皮质激素受体的其它化学剂；

以及

c)在一种具有5％CO₂和1％-20％氧气的培养箱中将所述的细胞在约31℃-37℃下培养约3-4周。