[发明专利]用于预防、诊断及治疗戊型肝炎病毒的多肽,及它们作为诊断试剂和疫苗

说明书

本发明涉及对戊型肝炎病毒(HEV)有高度免疫活性的多肽或其二聚体或三聚体，用于编码HEV-ORF2多肽的DNA分子，含有该DNA分子的表达载体，含有CDR多肽的抗体分子，用于编码CDR多肽的DNA分子，及它们的用途，尤其是在戊型肝炎预防、诊断及治疗方面的用途，如作为戊型肝炎的诊断试剂和疫苗。

背景技术

戊型肝炎病毒(HEV)是作为一种肠道传染性非甲非乙型肝炎的致病因子而在1983年首先被发现的(Balayan et al.，1983.Intervirology 20：23)。戊型肝炎主要流行于亚洲、非洲、中美洲的发展中国家，发达国家中的病例主要见于外来移民或出国旅行者中，可以以散发形式存在，也可出现大流行。从五十年代到九十年代间，先后有数次由于饮水污染导致的戊型肝炎暴发流行(Visvanathan，1957.Indian J.Med.Res.(Suppl.).45：1-30；Wong et al.，1980.Lancet.2：882-885；Myint et al.，1985.Am J Trop Med Hyg.34：1183-1189；Belabbes et al.，1985.J Med Virol.16：257-263；Hau et al.，1999.Am J Trop Med Hyg.60：277-280)。HEV感染多为自限性过程，少有慢性化，但当孕妇感染戊型肝炎时后果较为严重，病死率可高达17％以上(Tsega et al.，1992.Clin.Infec Dis.14：961-965；Di lawari et al.，1994.Indian J Gastroenterol.13：44-48；Hussaini et al.，1997.J Viral Hepat.4：51-54)。

发展血清HEV抗体检测试剂的必要性早已被广大研究人员所认识，但由于感染者或感染动物的HEV病毒分泌浓度极低而几乎不可能作为血清检测试剂的抗原来源，而迄今HEV的细胞培养的效率仍极低，同样也无法得到足够量的抗原用于检测试剂。

1991年，研究者首次获得了HEV的全长基因组序列，发现其为单股正链无包膜RNA病毒(Tam et al.，1991.Virology 185：120-131)。对HEV基因组的序列分析表明，约7.2kb的病毒基因组含有三个开放读码框架(ORF)。位于5’末端的ORF1编码病毒非结构蛋白，位于3’末端的ORF2编码病毒主要结构蛋白。ORF3的5’端与ORF1的3’端有1个碱基的重叠，3’端与ORF2有339个碱基的重叠。ORF3被认为编码另一个功能尚不明确的结构蛋白。(Tam et al.，1991.Virology185：120-131；Aye et al.，1992.Nucleic Acids Res.20：3512；Ayeet al.，1993.Virus Genes.7：95-109；Huang et al.，1992.Virology.191：550-558；Reyes et al.，1993.Arch Virol Suppl.7：15-25)。

过去HEV感染的检测主要依赖于免疫电镜技术(IEM)或免疫荧光技术，然而，这些检测技术十分繁杂，价格昂贵，而且在多数实验室难以完成。在HEV基因组克隆和测序完成之后，发展出了更灵敏的检测技术如酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白印迹试验(Western blot)和聚合酶链反应(PCR)等，用于HEV感染相关标志物的检测。

ELISA技术使用HEV重组蛋白或合成多肽作为抗原检测HEV相关抗原/抗体的存在。重组蛋白多选自HEV-ORF2和HEV-ORF3的羧基端，合成多肽选用的多为HEV-ORF2上的几个线性表位。