[发明专利]ESR基因部分序列及与猪的产仔性状相关的ESR基因和FSH－Beta基因的多态检测技术

权利要求书

1.猪的雌激素受体(ESR)基因的部分序列，它是附图1或2所述的序列。

2.检测猪的ESR基因多态性的PCR-RFLPs方法，其特征之一将正向引物序列(引物I：5′-CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG-3′，和一条反向引物(引物III：5′-CAGTTGAGAGCAAATCAATGCTAAG-3′)相结合，利用常规的PCR反应体系，PCR反应条件，酶切反应体系及反应条件和PCR产物用限制性内切酶PvuII裂解，在2.5-3％的琼脂糖凝胶电泳检测ESR基因的PCR-RFLPs多态性。

3.根据权利要求2所述的方法，其中PCR反应体系为：2.5μl 10×Taq DNA聚合酶缓冲液(500mmol/L KCl，100mmol/L Tris·Cl，15mmol/L MgCl₂，0.01％明胶)，2μl dNTPs(2.5mmol/L for each)，引物终浓度0.5μ mol/L，1U Taq DNA聚合酶，模板DNA 50-100ng，终体积25μl；

PCR反应条件：94℃ 4分钟，60℃ 1分钟，72℃ 1分钟2个循环，然后94℃ 1分钟，60℃ 1分钟，72℃ 1分钟31个循环，最后72℃ 8分钟，4℃长期保存；

酶切反应体系及反应条件：10μl PCR产物，加入0.5μl(10U)的PvuII限制性内切酶，37℃消化过夜(5-12小时)。

4.同时检测猪的ESR基因和FSH-Beta基因的多态性的方法，其特征在于合成两对检测FSH-beta基因PCR-RFLPs多态的引物：

引物IV：5′-ACTGGTCTATTCATCCTCTC-3′

引物V：5′-CCTTTAAGACAGTCAATGGC-3′

将权利要求2所述的ESR基因多态检测引物I、III和FSH-beta基因多态检测引物IV、V合并，将两对引物放于同一反应体系中进行PCR反应，使用合适的PCR反应条件，应用该反应体系在所述的PCR反应条件下进行PCR反应，然后将PCR反应产物用PvuII进行酶切，用4％的琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，从而对不同品种猪的群体进行分析。

5.根据权利要求4所述的方法，其中PCR反应体系为：2.5μl 10×Taq DNA聚合酶缓冲液(500mmol/L KCl，100mmol/L Tris·Cl，15mmol/L MgCl₂，0.01％明胶)，2μl dNTPs(2.5mmol/L for each)，引物终浓度0.5μmol/L，1U Taq DNA聚合酶，模板DNA 50-100ng。终体积25μl；

PCR反应条件：94℃ 4分钟58℃ 1分钟70℃ 1分钟1个循环，然后94℃ 1分钟58℃ 1分钟70℃ 1分钟31个循环，最后72℃8分钟，4℃长期保存；

酶切反应体系及反应条件：10μl PCR产物，加入0.5μl(10U)的PvuII限制性内切酶，37℃消化过夜(5-12小时)。