[发明专利]人髓质素的免疫测定方法以及用该方法诊断多发性硬化

说明书

技术领域

本发明涉及免疫测定血液中人髓质素(medullasin)的方法，以及利用该测定方法诊断多发性硬化的方法。更具体地讲，本发明涉及一种免疫测定血液中人髓质素的方法，该方法包括这样一个步骤：对血样进行预处理，以便精确测定血液中粒细胞中髓质素的含量，并涉及一种利用血液中髓质素的含量诊断多发性硬化的方法。

相关技术的说明

髓质素是一种存在于粒细胞等中的丝氨酸蛋白酶，它被认为在包括炎症表达，特别是慢性炎症表达的防御机制中普遍起着重要作用。在多种慢性炎性疾病的发展阶段，粒细胞中的髓质素的量增加，并在缓解阶段趋于正常。不过，在患有多发性硬化的患者中，观察到髓质素的量在发展阶段的前几天明显增加，并在缓解之前趋于正常。多发性硬化的特征是在中枢神经系统的白色物质中的局部脱髓鞘溃疡和神经胶质增生。这是一种严重的慢性炎性疾病，它会反复地缓解和恶化，并在很多情况下会在10-15年内导致死亡。尚未确定多发性硬化的原因，但它被认为是一种自身免疫病，其中，当免疫系统受到病毒或细菌的刺激时，自身抗体会攻击神经组织。这种病的诊断十分困难，并且，目前是通过磁共振成像(MRI)或类似方法进行的。不过，像MRI这样的方法需要非常大型的设备，以及很高的测定操作技能，因此费用昂贵。另外，测定骨髓液的方法的问题是会给患者造成很大的痛苦。鉴于这种情况，正在开发一种简单的诊断方法，通过该方法可以诊断上述疾病，了解这种疾病的状态，并且可以设想后果。结果，业已研究了测定血液中粒细胞内髓质素的活性的方法，并且开发了一种免疫测定方法，通过该方法可以方便地测定，提供了根据血液中粒细胞髓质素含量诊断多发性硬化的可能性。

不过，业已观察到这样的现象，在免疫测定人髓质素的方法中，在用一种含水介质稀释血样之后，如果所述测定是在不进行一种处理以便将存在于粒细胞中的髓质素完全排出粒细胞的情况下进行的话，测定值的可再现性不高，会导致测定值的波动。因此，需要一种能以良好的可再现性免疫测定血液中人髓质素的量的方法。

就多发性硬化是否可以根据血液中髓质素的量进行诊断的问题而言，这种判断需要检查大量的临床资料。不过，到目前为止，尚不存在这种类型的资料，而且，也难于进行精确诊断，因为难于获得血液中粒细胞内髓质素的精确测定值，这是由于测定值有很大的波动。因此，根据血液中髓质素的量诊断多发性硬化是困难的。

发明概述

因此，本发明的发明人为了解决上述问题业已进行了深入研究，结果，他们发现通过在用一种含水液体对血样进行处理以便完全裂解白细胞之后，用抗人髓质素抗体免疫测定人髓质素，可以良好的可再现性精确地测定血液中人髓质素，所述含水液体含有一种溶血产物或者是一种具有不同于人血渗透压的比渗透压的含水液体。

另外，随着所述能以良好的可再现性精确地测定人髓质素方法的建立，本发明的发明人注意到在血样中测定的人髓质素含量的大小和变化与多发性硬化的发作及其程度等密切相关，本发明就是根据这些发现而完成的。

本发明的第一方面涉及一种免疫测定血液中人髓质素含量的方法，其特征在于包括下面的步骤(a)-(b)：

(a)通过让所述血样与下面的含水液体(ⅰ)或(ⅱ)或(ⅰ)和(ⅱ)的含水液体的混合物接触，裂解血样中白细胞的步骤

(ⅰ)渗透压为250mOsm/kg.H₂O或更低的含水液体，或渗透压为310mOsm/kg.H₂O或更高的含水液体；

(ⅱ)含有一种溶血产物的含水液体；和

(b)用一种抗人髓质素抗体免疫测定由在步骤(a)中裂解的白细胞释放到血样中的人髓质素的量。

本发明的第二方面涉及一种诊断多发性硬化的方法，其特征在于包括下面的步骤(a)、(b)和(c)：

(a)通过让所述血样与下面的含水液体(ⅰ)或(ⅱ)或(ⅰ)和(ⅱ)的含水液体混合物接触，裂解血样中白细胞的步骤

(ⅰ)渗透压为250mOsm/kg.H₂O或更低的含水液体，或渗透压为310mOsm/kg.H₂O或更高的含水液体；

(ⅱ)含有一种溶血产物的含水液体；

(b)用一种抗人髓质素抗体免疫测定由在步骤(a)中裂解的白细胞释放到血样中的人髓质素的量；和

(c)观察在步骤(b)中测定的血液中人髓质素含量的大小和/或变化。

附图简述