[发明专利]一种新的多肽——人拓扑异构酶11.99和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人拓扑异构酶11.99，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在生物体内，染色体的浓缩、染色单体的分开有着非常重要的作用，还能够释放由于DNA转录和复制而产生的扭转应力(Roca，1995)。II型拓扑异构酶的催化活性包括该酶与双链DNA的共价结合，并且伴随着DNA卵裂形成一个瞬时裂开的混合物。然后这种酶能够结合ATP，使之构象发生改变以便于一个二级DNA双螺旋穿过开裂着的混合物。紧接着发生ATP的水解和DNA拓扑结构的重新封闭。

在鸟类和哺乳动物细胞内，存在两种异构形式的拓扑异构酶，分别是topo IIα(TOP2A)和topo IIβ(TOP2B)(Chung et al.，1989)。而在非脊椎动物细胞内，只有单一形式的拓扑异构酶。TOP2A位于染色体17q21-22，TOP2B位于染色体3p24(Tsai-Pflugfelder et al.，1988；Jenkins et al.，1992)。两种异构体在真核的有机体中高的进化程度表明了它们发挥着各不相同的生理学功能，它们在一些生物化学和药理学特性上有所不同(Mirski and Cole，1997；Austinand Marsh，1998)。它们的表达水平在不同的组织、不同的生长阶段以及整个细胞周期上都有较大程度的不同(Capranico et al.，1992)。

对TOP2A和TOP2B基因进行序列分析，发现TOP2A的全长序列比TOP2B有更大的分歧，表明TOP2B基因有更强的选择性。TOP2B基因含有36个外显子，其分子量大于49Kb，比TOP2A多了一个外显子(Shapiro and Senapathy，1987)。内在外显子长度从44到232bp不同，平均的内在外显子长度是135bp，TOP2A与TOP2B相似。

TOP2A和TOP2B两种基因的的蛋白产物在细胞内发挥着较为重要的作用，它们可以作为一些广泛用于治疗人类癌症的药物的细胞内靶子，接受这些药物并与它们结合，使它们在细胞内发挥功能。

本发明的人的基因与人拓扑异构酶II alpha-4基因在蛋白水平上有69％的同一性和77％的相似性。且两者均含有拓扑异构酶家族的特征性结构域。基于以上各点，故认为本发明的新基因为拓扑异构酶基因，命名为{人拓扑异构酶11.99}。并以此推断其与人拓扑异构酶II alpha-4相似，同为拓扑异构酶家族的成员，并具有相似的生物学功能。

由于如上所述人拓扑异构酶11.99蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人拓扑异构酶11.99蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人拓扑异构酶11.99蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人拓扑异构酶11.99以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人拓扑异构酶11.99的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人拓扑异构酶11.99的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人拓扑异构酶11.99的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人拓扑异构酶11.99的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人拓扑异构酶11.99的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人拓扑异构酶11.99异常相关的疾病的方法。

 本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。