[发明专利]一种新的多肽——人半胱氨酸开关11.22和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人半胱氨酸开关11.22，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

基质金属蛋白酶是一群重要的包含锌原子的金属蛋白酶，它们负责细胞外基质组分的降解和参与一些疾病的发生过程，例如在正常胚胎发生和扰动中的胶原蛋白和蛋白聚糖以及关节炎、癌症、齿根骨膜炎和骨质疏松症。

已定义的一个基质金属蛋白酶家族包含至少7个蛋白成员，它们的分子量从28000到92000并且都与胶原蛋白酶有关。所有的家庭成员都是以酶原的形式分泌的，降解位于N末端约10,000道尔顿多肽片段后变成活性蛋白质。

基质金属蛋白酶C末端下游有一个八肽区域，PRCGVPDV，其中包括两个高度保守的氨基酸残基。这个八肽区域参与基质金属蛋白酶的自我抑制作用[Park A.J.，Matrisian L.M.，Kells A.F.，Pearson R.，Yuan Z.，Navre M.J.Biol.Chem.266：1584-1590(1991)]。位于此区域内的一个半胱氨酸残基通过它的三个硫醇基团螯合活性位点的锌原子，从而抑制基质金属蛋白酶的活性。因此该区域被命名为半胱氨酸开关或自我抑制区域[Springman，E.B.，Angleton，E.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87，364-368]。

该区域的特征模式是：P-R-C-[GN]-x-P-[DR]-[LIVSAPKQ]其中C代表螯合的锌原子。

由于如上所述人半胱氨酸开关11.22蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人半胱氨酸开关11.22蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人半胱氨酸开关11.22蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人半胱氨酸开关11.22以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人半胱氨酸开关11.22的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人半胱氨酸开关11.22的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人半胱氨酸开关11.22的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人半胱氨酸开关11.22的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人半胱氨酸开关11.22的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人半胱氨酸开关11.22异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中312-620位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1581位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人半胱氨酸开关11.22蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与人半胱氨酸开关11.22蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。