[发明专利]一种新的多肽——人蛋白水解酶调节蛋白10.67和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人蛋白水解酶调节蛋白10.67，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

大肠杆菌可被专性寄生物，一种双链DNA病毒，λ噬菌体侵染。λ噬菌体是一种温和噬菌体，可在大肠杆菌中以两种状态增殖。一种为裂解状态，噬菌体DNA自主复制并指引衣壳蛋白的形成包装以及宿主细胞溶原。另一种为溶原状态，λDNA整合至宿主细胞基因组并被复制。溶原状态的噬菌体被称为原噬菌体；宿主被称为溶原体，并被认为是免疫的。

调控蛋白质活性的一种方法是通过控制其稳定性。这可通过控制特定蛋白水解酶表达或是合成特异性抑制这些蛋白水解酶的蛋白而完成。在λ噬菌体的溶原化过程中，CIII蛋白，一种小型的噬菌体编码的多肽，作为正因子。在细胞中该蛋白的存在使得CII转录激活因子，一种通常极不稳定，半衰期为1-2分钟的蛋白稳定，此后稳定的CII蛋白能够激活CI，一种编码阻碍发育所需的蛋白转录的阻抑蛋白基因，从而启动溶原的建立。λCIII蛋白增加了各种表达不同CII蛋白的λ噬菌体的溶原性。此外，CIII的过度产生可能通过固定RNA聚合酶，σ32的热激特异亚基而诱导热激反应。CIII通过与被稳定的蛋白结合或是与这些蛋白的特异细胞蛋白水解酶结合而直接抑制蛋白水解酶。不同λ噬菌体中的CIII蛋白的中心部分是序列最为相似的区域，并且对该蛋白的活性是必须且充分的。我们以这22个残基序列作为一特征序列模板：E-S-x-L-x-R-x(2)-[KR]-x-L-x(4)-[KR](2)-x(2)-[DE]-x-L。其结构为两亲性的α-螺旋，该螺旋中的亲水性部分含有大部分碱性残基，这是结合RNA及DNA的蛋白的特征。因而，CIII本身可能是一种基因表达调节子，参与调控负责降解CII及σ³²蛋白的宿主基因，而CIII的保守螺旋域被认为是调节蛋白水解酶以及降解CII及σ³²蛋白的活性位点，故此认为CIII作为那些蛋白水解酶的竞争性抑制剂发挥效用。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人蛋白水解酶调节蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人蛋白水解酶调节蛋白10.67。

由于如上所述人蛋白水解酶调节蛋白10.67蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人蛋白水解酶调节蛋白10.67蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人蛋白水解酶调节蛋白10.67蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人蛋白水解酶调节蛋白10.67以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人蛋白水解酶调节蛋白10.67的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人蛋白水解酶调节蛋白10.67的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人蛋白水解酶调节蛋白10.67的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人蛋白水解酶调节蛋白10.67的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人蛋白水解酶调节蛋白10.67的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人蛋白水解酶调节蛋白10.67异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中510-803位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2035位的序列。