[发明专利]一种新的多肽——酰基辅酶A脱氢酶12.65和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——酰基辅酶A脱氢酶12.65，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

生物体内的呼吸链由下列几类分子组成：吡啶核苷酸连接的脱氢酶，黄素相关的脱氢酶(即黄素蛋白)、铁硫蛋白、辅酶Q及细胞色素等。黄素相关的脱氢酶系是呼吸链的主要组分，常见的有两种：以黄素单核苷酸(FMN)为辅基的NADH脱氢酶和以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的琥珀酸脱氢酶。FMN和FAD分子在生物体内参与加氢和脱氢反应，是传递两个氢原子的递氢体。

酰基辅酶A脱氢酶为一种黄素蛋白，在生物体内催化酰基辅酶A酯的α、β脱氢反应，并将电子转运给电子转运蛋白ETF。至今，人们已克隆得到了多个酰基辅酶A脱氢酶家族的成员，有长链酰基辅酶A脱氢酶、短链酰基辅酶A脱氢酶及异戊酰辅酶A脱氢酶等。对鼠酰基脱氢酶家族各成员的氨基酸序列进行分析发现，该家族的成员，无论是长链酰基辅酶A脱氢酶还是短链酰基辅酶A脱氢酶或异戊酰辅酶A脱氢酶均有较高的同源度，这暗示着这些蛋白可能由同一个基因祖先进化而来[Matsubara Y.，Indo Y.et al.，1989，J.Biol.Chem.，264：16321-16331]。该脱氢酶家族的成员在生物体内有着重要的生理学功能，它们直接调节着生物体内的呼吸链，其表达异常将导致呼吸链的功能异常，从而导致生物体能量转换系统的功能异常，及引发与之相关的各种疾病。而异戊酰辅酶A脱氢酶的功能异常是异戊酸血症发生的直接原因[Tanaka K.，Ikeda et al.，1987，Enzyme，38：91-107]。

酰基脱氢酶蛋白家族的成员均含有两个保守的序列片段，第一个位于酶的中心区域，第二个在蛋白C末端区域。这两个序列片段分别为序列1：[GAC]-[LIVM]-[ST]-E-X(2)-[GSAN]-G-[ST]-D-X(2)-[GSA]及序列2：[QDE]-X(2)-G-[GS]-X-G-[LIVMFY]-X(2)-[DEN]-X(4)-[KR]-X(3)-[DEN]。所有的该家族的成员均含有这两个保守的序列片段，其中保守序列1可能为蛋白发挥正常生理学功能的中心区域。酰基脱氢酶在生物体内调节着呼吸链的作用，其表达异常呼吸链就不能正常地提供生物体能量代谢所需的能量，从而直接影响各种与呼吸链相关的代谢反应，引发各种与能量代谢相关的代谢紊乱性疾病。酰基辅酶A脱氢酶为蛋白发挥生物学功能提供所需的能量及稳定蛋白在生物体内的结构，协助蛋白完成其正常的生理学功能。其表达异常将直接导致一些蛋白的异常表达及功能异常，从而引发各种相关的疾病。

本发明的新的酰基辅酶A脱氢酶12.56亦含有如上所述的酰基脱氢酶家族的两个保守的序列片段，其为人酰基脱氢酶家族的新成员，且与该家族的其他成员相似，具有相似的生物学功能，在生物体内与各种能量代谢相关的代谢紊乱症的发生有关。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与酰基辅酶A脱氢酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为酰基辅酶A脱氢酶12.65。

由于如上所述酰基辅酶A脱氢酶12.65蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的酰基辅酶A脱氢酶12.65蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新酰基辅酶A脱氢酶12.65蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——酰基辅酶A脱氢酶12.65以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码酰基辅酶A脱氢酶12.65的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码酰基辅酶A脱氢酶12.65的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产酰基辅酶A脱氢酶12.65的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——酰基辅酶A脱氢酶12.65的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——酰基辅酶A脱氢酶12.65的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与酰基辅酶A脱氢酶12.65异常相关的疾病的方法。