[发明专利]一种新的多肽——人加双氧酶9.13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人加双氧酶9.13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细菌环的羟基化加双氧酶是多成分的酶复合体，它由一个羟化酶成分和一个电子转移成分构成。羟化酶成分本身包含两个亚单元：一个50Kd的α-亚单元；一个20Kd的β-亚单元。电子转移成分本身也包含两个亚单元：一个铁氧还蛋白亚单元和一个铁氧还蛋白还原酶亚单元，或者是单独一个具有铁氧还蛋白以及铁氧还蛋白还原酶两种截然不同功能的亚单元。

这些加双氧酶含有一个芳香环羟化酶成分，羟化酶有两个亚单元，这两个亚单元在不同的加双氧酶中都很类似。羟化酶成分中α-亚单元既结合了一个2Fe-2S型的铁硫蛋白，又结合了一个铁原子，而β-亚单元没有包含任何可探测到的铁原子或不稳定的硫化合物(Neidle E.L.，Hartnett C.，Ornston N.L.，Bairoch A.，Rekik M.，Harayama S.1991 J.Bacteriol.173：5385-5395)。在α-亚单元蛋白的N末端有一个含24个氨基酸残基的保守区域，该区域含有能结合铁硫蛋白的2个半胱氨酸和2个组氨酸残基。我们把该区域作为一个信号模式。

保守序列为：C-x-H-R-[GA]-x(8)-G-N-x(5)-C-x-[FY]-H

      其中，2个C和2个H被认为是[2Fe-2S]的配位体。

加双氧酶的电子转移成分N末端区域类似于叶绿体型黄素蛋白，而C末端区域类似于几个氧化还原酶。电子转移成分中有一个单独的铁硫黄素蛋白，具有NADH-细胞色素c的还原活性，使电子从NADH转移到芳香环上，并使之羟化。

本次发现的加双氧酶中芳香环羟化酶α-亚单元上的保守序列，有助于进一步揭示黄素类辅酶的作用机制，以及金属离子例如Fe(II)和金属-硫簇在反应中的催化性作用。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人加双氧酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人加双氧酶9.13。

由于如上所述人加双氧酶9.13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人加双氧酶9.13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人加双氧酶9.13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人加双氧酶9.13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码入加双氧酶9.13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人加双氧酶9.13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人加双氧酶9.13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人加双氧酶9.13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人加双氧酶9.13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人加双氧酶9.13异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中631-882位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1297位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。