[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白9.46和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白9.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

锌指蛋白是一种DNA结合蛋白，最早在非洲爪蟾RNA聚合酶III介导的5S rRNA基因转录因子TF III A蛋白的氨基酸序列中发现。此后发现锌指蛋白在不同生物的各种组织中均有表达如果蝇细胞分裂基因Kruppel，在人类中这些组织包括神经系统如脑、造血细胞、表皮组织、各种与分泌吸收相关的组织及与肿瘤和无限增殖细胞系相关的组织等。据估计在人类基因组上锌指蛋白基因超过了1％(Bellefroid et al.，1989；Pellegrino and Berg，1991)。锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种：C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.，1998)。其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.，1995)。锌指蛋白的C2H2构型如下：

典型的锌指结构在长度上大约由28个氨基酸残基构成，为Cys-Cys……His-His排列，锌指单元包含有一段相对保守的序列：Cys-X_2-4-Cys-X₃-Phe-X₅-Leu-X₂-His-X_2-4-His(Bray，p.et al.，1993)。锌指结构中两个保守的Cys参与组成一个反向平行的β折叠，两个保守的His参与组成α螺旋，这两个结构与核心的Zn原子结合形成一个紧密的球形区域(Pabo，C.A.andSauer，R.T，1992)。此类锌指蛋白往往具有1个到86个锌指结构(Rhodes，D.andKlug，1993)。除了保守的锌指结构，连接两个相邻的Kruppel的C2H2构型锌指蛋白常常但不总是包含保守的特异性氨基酸序列TGEKP(Bray，p.etal.，1993)。在锌指蛋白中，Zn的作用是使蛋白质分子形成指型构象的骨架与DNA结合。

研究表明，锌指结构在许多与“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有关的蛋白里都有发现。C2H2构型的锌指蛋白通过结合DNA和或RNA上的特殊序列来调控基因转录(Engelke，D.R et al.，1980；Kadonaga，J.T etal.，1987；Stanojevic，D.et al.，1989)，一些C2H2构型的锌指蛋白通过与其它一些锌指蛋白的相互作用来调控基因转录与表达(Lee，J-S.etal.，1993；Seto，E.et al.，1993；Maheswaran.S.et al.，1993)，另有一些C2H2构型的锌指蛋白起着调节发育、调控RNA代谢、并可能影响染色质的包装(E1-Baradi，T and Pieler.T.，1991)。现有的研究表明，C₂H₂类型的锌指结构域在发育调控中起关键作用。例如，在Drosopila Kruppel(Rosenberg，1986)和hunchback(Tautz，1987)锌指蛋白中，此结构域与胚胎模式形成有关；在鼠Krox-20锌指蛋白中，此结构域与后脑模式形成及细胞增殖控制有关(Chavrier，1988；Wilkinson，1989)；GL13在常染色体显性发育异常Greig综合症中(vortkamp，1991)中；有些锌指蛋白与肿瘤形成有关，WT1在Wilm’s肿瘤及先天性生殖尿道发育中(Haber，1990)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人锌指蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人锌指蛋白9.46。

由于如上所述人锌指蛋白9.46蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白9.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白9.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白9.46以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。