[发明专利]一种新的多肽——肝素结合蛋白13.09和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——肝素结合蛋白13.09，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在生物体内含有一类细胞外肝素结合蛋白，这些蛋白在生物体内涉及各种细胞的生长与分化调控过程，这类蛋白构成了一新的肝素结合蛋白家族，该家族的成员均为一些生长调节因子[Tsutsui J.，Uehara K.et al.，1991，Biochem Biophys ResCommun，176：792-797]。不同来源的该家族的成员均含有较高的序列同源性。

这些生长调节因子是一些高度相关的蛋白，约有140个氨基酸残基组成，且这些蛋白均含有10个保守的涉及二硫键形成的半胱氨酸残基。该蛋白家族成员的蛋白序列中还富含一些基础氨基酸残基和色氨酸。其含10个保守的半胱氨酸残基的区域如下所示：XXXXXXXCXXXCXXXCXXXXXCXXXCXCXXXXCXXXXCXXXXXXXXXXCXXXXCXXXXXXXXXXXXX

  *************       *************‘C’：为保守的半胱氨酸残基，可能涉及二硫键的形成。‘*’：为两个保守的一致性序列片段的位点。

研究发现，该生长因子家族成员的蛋白序列中含有两个保守的序列片段，这两个一致性序列片段如下所示：序列片段1：S-[DE]-C-X-[DE]-W-X-W-X(2)-C-X-P-X-[SN]-X-D-C-G-[LIVMA]-G-

       X-R-E-G；序列片段2：C-[KR]-[LIVM]-P-C-N-W-K-K-X-F-G-A-[DE]-C-K-Y-X-F-[EQ]-X-W-G-

       X-C；这两个序列片段均含有大量的半胱氨酸残基，且在所有的家族成员中均存在。该序列片段可能是蛋白与其它蛋白结合并发挥其生长调节功能的重要活性区域，该两个片段的突变都将影响蛋白在生物体内发挥正常的生理功能。该蛋白家族的成员在生物体内涉及各种细胞分化及生长的重要调节过程，该类蛋白的表达异常将导致生物体一些相关代谢途径的异常。该蛋白的表达异常通常与生物体内各种发育代谢紊乱症、一些肿瘤及癌症等疾病的发生相关。

由于如上所述肝素结合蛋白13.09蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的肝素结合蛋白13.09蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新肝素结合蛋白13.09蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——肝素结合蛋白13.09以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码肝素结合蛋白13.09的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码肝素结合蛋白13.09的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产肝素结合蛋白13.09的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——肝素结合蛋白13.09的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——肝素结合蛋白13.09的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与肝素结合蛋白13.09异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中69-428位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1780位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。