[发明专利]一种通过用种间核转移技术生产人类克隆胚胎的方法

说明书

本发明的背景技术

发明领域

本发明涉及一种用种间核转移技术生产人类克隆胚胎的方法，更具体地说，涉及一种用种间核转移技术生产人类克隆胚胎的方法，该方法把从人类组织得到的体细胞的胞核转移到来源于牛的成熟卵母细胞中。本发明还涉及由上述方法生产的人类克隆胚胎。

发明背景

人们长期考虑用受精生产动物，这涉及到雌雄配子。然而人们已经进行了巨大的努力产生具有相同的外貌和相同的遗传特征的克隆动物。

由于生物技术和基因工程的发展，最近已经成功地生产出具有所希望的有用作物特征的各种基因重组植物(见：Schweizer等，PlantJournal,20：541-552,1999)。在动物方面，有许多克隆动物的成功例，包括：克隆羊(见：Wilmut等，自然，385:810-813,1997)、克隆牛(见：Wells等，Reprod.Fertil.And Develop.,10:369-378,1998)和克隆小鼠(见：Wakayama等，自然，394:369-374,1998)。因为没有建立在生物技术上的高技术就不可能实现克隆动物的生产，人们把评估该技术在相关领域内的技术发展作为一个标准。

同时因为动物的干细胞有发育成每个器官的潜能，促使人们通过得到和培养它们研究其分化成各种器官的机制。进行这种研究时，重要的是采用具有相同的组织特异性的材料，以减少许多不同的研究中的差异。然而，显然并不是总可以得到具有相同的组织特异性的适宜材料。虽然近来采用体细胞的克隆技术便利了提供具有相同的组织特异性的材料，但是对于人类组织还不令人满意。

在此情况下，有强烈的需要，开发一种得到具有相同的组织特异性的人胚干细胞。

发明概述

根据本发明，我们发现：可以通过种间核转移技术成功地产生人胚干细胞类，种间核转移技术涉及融合牛的卵母细胞和用人类皮肤细胞，然后在体外把人类克隆胚胎培养到桑椹胚/胚泡阶段。

因此本发明的首要目的是提供一种通过种间核转移技术生产人类克隆胚胎的方法。

本发明的另一个目的是通过所述方法提供人类克隆胚胎。

附图的简要说明

由以下描述结合附图会清楚了解本发明的上述目的和其它目的及本发明的特征，图中：

图1为供体体细胞的照片。

图2是一张照片，表示用一根持定(细玻璃)管和一根切割(细玻璃)管切割受体卵母细胞的透明带的过程。

图3是一张照片，表示通过从受体卵母细胞取走第一极体和胞核进行去核的过程。

图4是一张照片，表示用一根持定管和一根注射管把体细胞移入去核的卵母细胞的过程。

本发明的详细描述

本发明生产人类克隆胚胎的方法包含以下步骤：制备从人体采集的供体体细胞系；体外将从牛卵巢采集到的卵母细胞培育成熟；去掉卵母细胞周围的丘细胞，切割成熟的卵母细胞的透明带的一部分并且挤出部分包括第一极体的胞质，以得到去核受体卵母细胞；通过把供体细胞注射进去核卵母细胞而把核移入受体的卵母细胞，然后通过随后的电融合和激活电融合后的细胞得到胚胎；后激活并且在体外培养胚胎。

本发明的生产人类克隆胚胎的方法进一步说明如下。步骤1：制备供体细胞

把从人体采集的体细胞系制备成供体细胞：尽管没有限制从人体采集什么细胞作供体细胞，但优选的细胞系包括：皮肤细胞或者从新生儿脐带采集的成纤维细胞。更优选的用作体细胞的细胞系是从皮肤组织分离的皮肤细胞。可使用常规的已知的方法稍加改动后，制备所述细胞系(Mather＆Barnes，细胞生物学方法，第57卷，动物细胞培养方法，Academic Press，1998)。

例如，清洗和粉碎皮肤细胞或者新生儿脐带的成纤维细胞。然后，用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原蛋白酶在39℃、5％的CO₂的环境下处理这些细胞，然后在补充了非必需氨基酸、10％的胎牛血清(FBS)和1％青霉素-链霉素的Dulbecco’s氏改进的Eagle氏介质(DMEM)中，在与上述相同的环境下培养。

体细胞系由传代培养、血清饥饿培养或者冷冻方法储存。供体细胞系的传代培养定期地通过在胰蛋白酶处理后用新的培养基代替旧的培养基来进行。血清饥饿培养通过施用补充0.5％FBS的DMEM以Wilmut等的方法进行(见：Wilmut等，自然，386:810-813,1997)。这样储存的细胞系在后面的步骤中用作供体细胞。步骤2：制备受体卵母细胞