[发明专利]漂白血样的方法,使用此方法的诊断方法和诊断试剂盒

说明书

发明背景

发明领域

本发明涉及一种漂白血样的方法，使用完全血样的诊断方法和诊断试剂盒。更具体地说，本发明涉及使用氧化剂漂白血样的方法，和采用上述方法测定包括肝炎病毒等特定病原体引起的感染的诊断方法和诊断试剂盒。

相关技术的描述

免疫色层析试验(于此指“ICA”)由于其快速简捷被称为“快速测试”。在这样的试验中，与金颗粒共轭的示踪抗体分子与血清样品所含的特定抗原结合，此后形成络合物，并由于毛细管现象通过硝化纤维膜(于此指“NC膜”)的微孔。这些络合物最终结合并捕捉固定在NC膜的孔内表面的抗体，使得阳性线显色，由此通过肉眼可以判断血清样品中含有特定的抗原。

如上所述，由于方法简单且测试结果获得迅捷，ICA被广泛用于多种分析物的检测，例如荷尔蒙(Laitinen,M.P.等，Acta.Chem.Scand.50,141-147(1996))，抗原(Sato,K.等，J.Clin.Microbiol.34,1420-1423(1996))，抗体(Vaughn,D.W.等,J.Clin.Microbiol.36,234-238(1998))和药物(Habib,M.P.等，Chest 92,129-134(1987))。

此外，许多进行ICA测试的诊断试剂盒目前已经商业生产，使得所谓患者可以在家进行检测或监测多种症状或病症。

本发明人已经研发用于测定B型肝炎表面抗原(于此指“HBsAg”)的ICA试剂盒。Hyeong-Soon Shin等在J.Korean Soc.Virology(病毒学)，27,No.2,137-141(1997)详细地描述了ICA试剂盒。

ICA试剂盒含两个主要部分。其中一部分是NC膜，其表面有两条看不见的线，另一部分是在表面上含有干的抗体-金颗粒共轭物的玻璃纤维过滤器。对被检测抗原的专一单克隆抗-HBs抗体和山羊抗-鼠IgG这两种抗体分别处于NC膜的上线和下线。

样品加入ICA试剂盒的样品阱，这时NC膜的表面形成干态的抗体-金颗粒共轭物再水合，与血清样品中的抗原相结合形成络合物，并由于毛细管现象通过硝化纤维膜。

在下文，抗原络合物与固定在下线上的单克隆抗-HBs抗体相结合而显色。此外，由于固定在上线上的山羊抗-鼠IgG抗体在没有抗原时仍可以与抗体-金颗粒共轭物反应而显色，因此每一次测试中上线都会显色，可用作对比线。那就是说，当血清样品中存在抗原，ICA试剂盒上阳性线和对比线变成可见，但是当没有抗原存在时，只有对比线可见。

同时，由于红血球(RBCs)的颜色的视觉障碍，因此完全血液不能用于ICA试剂盒。因此，ICA试剂盒目前使用澄清血清作为样品进行测试，血浆先进行凝结，并离心分离血细胞。上述预处理过程由于完全血液收集之后凝结和分离制备血清而需要额外的时间和设备削弱了ICA试剂盒的迅速和简单的特点。

为解决以上问题，这些试剂盒使用血液分离过滤器抑制完全血液中的血细胞的通过而阻断血细胞，保证只有过滤后的血清能显色(Pall公司，WO 960314；和Boehringer Mannheim,EP 586789)。但是，过滤器延迟了血清的显色，而且由于未经处理的完全血液在阱中凝结而阻塞了样品阱使得有些样品不能测试。此外，所使用的血清样品通过NC膜之后越干，样品阱中完全血液的盐浓度越高，最后导致红血球的破裂。细胞内的物质包括红色素会穿过过滤器，覆盖在NC膜上，妨碍了正确的识别。

因此，迫切需要一种能直接使用完全血液样品的ICA试剂盒。

发明简介

为克服上述缺点，发明人进行深入的研究，开发了一种漂白血样的方法，并使其适用于传统ICA试剂盒，这意味着ICA试剂盒可以直接测定完全血样中多种抗原或抗体，而不损害其简单迅捷的特点。从而，发明了本方法。

因而，本发明的目的是提供一种漂白血样的方法。

本发明的另一目的是提供一种使用ICA试剂盒和漂白血样的这一方法检测完全血样中抗原或抗体的方法。

本发明的另一目的是提供一种ICA试剂盒，可以使用未经分离的血液作为样品。

通过以下详细的描述和所附权利要求可以更清楚地说明本发明的其它目的和优点。

附图的简单描述

图1显示根据本发明漂白后的以及未经处理的血液悬浮液的扫描图像。

图2用于说明不同浓度的过氧化氢对完全血液的作用。

发明的详细描述