[发明专利]用于检测膜来源的caspase活性和其调节剂的方法

权利要求书

1.用于鉴定膜来源的caspase活性的方法，包括在足以允许caspase活性形成的条件和时间下孵育含有重膜或核膜的膜组分，以及随后检测caspase的活性。

2.权利要求1的方法，其中caspase活性通过测量caspase底物的转化来检测。

3.权利要求2的方法，其中底物的转化通过时程分析测量。

4.权利要求2的方法，其中底物的转化通过终点分析测量。

5.权利要求2的方法，其中底物的转化通过选自荧光光谱学、质谱分析、HPLC、比色法、荧光自显影、放射显影、凝胶电泳、层析和N端肽测序的方法来检测。

6.权利要求1的方法，其中caspase活性通过确定caspase的加工来检测，所述加工导致产生大caspase亚基和小caspase亚基。

7.权利要求6的方法，其中大、小caspase亚基通过选自荧光光谱学、质谱分析、HPLC、比色法、荧光自显影、放射显影、凝胶电泳、层析和N端肽测序的方法检测。

8.权利要求1-7之任意一项的方法，其中该膜组分来源于非凋亡细胞。

9.权利要求1-7之任意一项的方法，其中该膜组分来源于经细胞凋亡刺激物处理过的细胞。

10.权利要求9的方法，其中该细胞凋亡刺激物选自：生长因子剥夺、星形孢菌素、抗fas抗体、紫外辐射、γ辐射和肿瘤坏死因子。

11.用于鉴定膜来源caspase活性的抑制剂的方法，包括在至少一种候选抑制剂存在和不存在时，将膜组分与caspase底物接触；然后比较caspase底物转化的水平，并由此鉴定膜来源的caspase活性的抑制剂。

12.权利要求11的方法，其中该caspase底物含有可被caspase切割的位点，且该底物选自蛋白质、多肽、寡肽、肽模拟物和肽。

13.权利要求12的方法，其中该底物含有肽DEVD。

14.权利要求11的方法，其中该膜组分是从未经刺激的选自下组的组织培养细胞制备的：697类淋巴母细胞、E15初生大脑皮层细胞、MN9D细胞、Jurkat T细胞和FL5.12细胞。

15.权利要求11的方法，其中该膜组分含有选自重膜和核膜的膜。

16.权利要求11的方法，其中该膜组分含有重膜。

17.权利要求11的方法，其中底物转化通过时程分析来检测。

18.权利要求11的方法，其中底物转化通过终点分析来检测。

19.权利要求17或18的方法，其中通过选自荧光光谱学、质谱分析、HPLC、比色法、荧光自显影、放射显影、凝胶电泳、层析和N端肽测序的方法检测caspase底物的转化。

20.权利要求11的方法，其中该膜组分来源于表达促细胞凋亡多肽的细胞。

21.权利要求11的方法，还包括在加入所述caspase底物之前或同时将该膜组分与caspase的激活物一起孵育。

22.权利要求11的方法，其中该膜组分来源于非凋亡细胞。

23.权利要求11的方法，其中该膜组分来源于经细胞凋亡刺激物处理过的细胞。

24.权利要求23的方法，其中该细胞凋亡刺激物选自：生长因子剥夺、星形孢菌素、抗fas抗体、紫外辐射、γ辐射和肿瘤坏死因子。

25.用于鉴定膜来源caspase活性的增强剂的方法，包括在至少一种候选增强剂存在和不存在时用caspase底物接触膜组分，然后比较caspase底物转化的水平，由此鉴定膜来源的caspase活性的增强剂。

26.权利要求25的方法，其中该caspase底物含有可被caspase切割的位点，且该底物选自蛋白质、多肽、寡肽、肽模拟物和肽。

27.权利要求26的方法，其中该底物含有肽DEVD。