[发明专利]经微生物学方法制备假单胞菌酸A抗生素的方法

说明书

发明领域

本发明涉及用于制备抗生素假单胞菌酸A(Pseudomonic acid A)(莫匹罗星)的微生物学方法。

发明背景

假单胞菌酸A，也称作莫匹罗星，为一种主要对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae))和一些革兰氏阴性菌(如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae))具有生长抑制作用的抗生素[A.Ward，D.M.Campoli-Richards，Drugs 32，425-444(1986)]且它的最小抑制浓度处于0.02-0.5mg/dm3范围内。通过抑制异亮氨酸-tRNA合酶，假单胞菌酸A影响病原菌的肽合成[J.Hughes和G.Mellows，Biochem.J.191，209-219(1980)]。该抗生素的一个有利特征是它对人和动物具有非常低的毒性且其在埃姆斯(Ames)试验中为阴性。目前假单胞菌酸A以多种制剂用于人的治疗，以治疗皮肤感染(例如脓疱病、脓皮病)、鼻和外耳感染、痤疮、烧伤、湿疹、牛皮癣、在溃疡情况中用于治疗二次感染，和用于预防医院感染。

假单胞菌酸A的化学结构测定如由式(I)描述的那样，为9-{4[5S(2S，3S-环氧-5S-羟基-4S-甲基己基)-3R，4R-二羟基-四氢吡喃-2S-基]-3-甲基丁-2(E)-烯酰氧基}壬酸[E.B.Chain和G.Mellows，J.C.S.Chem.Comm.847-848(1974)；R.G.Alexander，J.P.Clayton，K.Luk，N.H.Rogers，T.J.King，J.C.S.Perkin I.561-565(1978)]：

已知荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)能够产生假单胞菌酸A。按英国专利1,395,907号，荧光假单胞菌NCIB 10586菌株能够生物合成由假单胞菌酸A和它的在C₂和C₃碳原子之间的双键处于顺式位置的异构体和假单胞菌酸B组成的假单胞菌酸复合体。成分比例为4.5∶4.5∶1。然而，按照日本专利申请52-70083号，荧光假单胞菌Y-11633菌株能够生物合成由以9∶0.5∶0.5的比例存在的假单胞菌酸A、假单胞菌酸B和另外两种具有未知结构的成分组成的假单胞菌酸复合体。

发明概述

本发明涉及制备假单胞菌酸A的方法，方法包括：在深层通气的条件下，于包含至少一种有机氮或碳源的培养基上培养能够生物合成假单胞菌酸A的假单胞菌(Pseudomonas)菌株，且使假单胞菌培养物发酵以便形成假单胞菌酸A。假单胞菌菌株优选为匈牙利布达佩斯国立农业和工业微生物保藏中心(National Collection ofAgricultural and Industrial Microorganisms)保藏的假单胞菌属菌株19/26号，保藏号NCAIM(P)B 001235，或它的产生假单胞菌酸A的突变型或变种。

本发明也涉及在深层通气的条件下能够生物合成假单胞菌酸A的假单胞菌培养物，其基本上由新的假单胞菌属菌株19/26号组成。

本发明还涉及新的假单胞菌属菌株19/26号的生物纯的培养基。

图的简述

图1为假单胞菌属菌株19/26号(NCAIM(P)B001235)产生的假单胞菌酸复合体的HPLC色谱图。

发明详细描述

在寻找细菌产生的抗微生物抗生素过程中，在含有为预防真菌生长的10μg/ml对羟苯乙基三甲基铵和5μg/ml环己酰亚胺的营养琼脂培养基上，分离到20,000种微生物。

在不同的革兰氏阳性和革兰氏阴性试验微生物上，检查所分离的菌株的摇瓶培养基的抗菌有效性和它们对治疗实践中出现的对抗生素抵抗的变种。通过应用抗生素抵抗的试验微生物，我们想促进识别具有新的作用模式的抗菌抗生素。