[发明专利]维持和扩增造血干细胞和/或祖细胞的方法和仪器

权利要求书

1.一种扩增/维持未分化的造血干细胞或祖细胞的方法，该方法包括以下步骤：

(a)获得未分化的造血干细胞或祖细胞；和

(b)将所述未分化的造血干细胞或祖细胞接种到静止相活塞流动生物反应器中，其中三维基质细胞培养物已被预先建立在以片的形式存在的底物上，所述底物包括形成生理学上可接受的三维纤维网状物的非编织纤维基质，由此扩增/维持未分化的造血干细胞或祖细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞为从选自脐带血、流动的体循环血液和骨髓的组织中分离的细胞。

3.权利要求1的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞和所述基质细胞培养物的基质细胞分享共同的HLA抗原。

4.权利要求1的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞和所述基质细胞培养物的基质细胞来自单一个体。

5.权利要求1的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞和所述基质细胞培养物的基质细胞来自不同的个体。

6.权利要求1的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞和所述基质细胞培养物的基质细胞来自相同的物种。

7.权利要求1的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞和所述基质细胞培养物的基质细胞来自不同的物种。

8.权利要求1的方法，其中所述基质细胞培养物的基质细胞生长到至少每立方厘米所述底物5×10⁶个细胞的密度。

9.权利要求1的方法，其中所述基质细胞培养物的基质细胞生长到至少每立方厘米所述底物10⁷个细胞的密度。

10.权利要求1的方法，其中当所述接种后所述生物反应器中的流动切断至少10小时时，进行所述将所述未分化的造血干细胞或祖细胞接种到所述静止相活塞流动生物反应器中的步骤。

11.权利要求1的方法，其中所述纤维形成为总体积百分比40至95％的孔体积和10微米至100微米的孔径大小。

12.权利要求1的方法，其中所述基质由选自平面、非圆形和中空纤维和它们的混合物的纤维制成，所述纤维直径或宽度为0.5微米至50微米。

13.权利要求1的方法，其中所述基质由具有2微米至20微米宽度的纤维形成的带状结构组成，且其中纤维的宽度与厚度的比例为至少2∶1。

14.权利要求1的方法，其中所述基质具有为总体积百分比60至95％的孔体积。

15.权利要求1的方法，其中基质具有50-1000μm的高度。

16.权利要求1的方法，其中基质的材料选自聚酯类、聚乙烯、聚氟氯乙烯类、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚砜类、乙酸纤维素、玻璃纤维和惰性金属纤维。

17.权利要求1的方法，其中基质以选自方形、环形、盘形和十字形的形状存在。

18.权利要求1的方法，其中基质以盘的形式存在。

19.权利要求1的方法，其中基质用聚-D-赖氨酸包衣。

20.权利要求1的方法，该方法还包括分离所述未分化的造血干细胞或祖细胞的步骤。

21.一种扩增/维持未分化的造血干细胞或祖细胞的方法，该方法包括以下步骤：

(a)获得未分化的造血干细胞或祖细胞；和

(b)在包含基质细胞条件培养基的培养基上培养所述未分化的造血干细胞或祖细胞，所述基质细胞条件培养基衍生于静止相活塞流动生物反应器，其中在以片的形式存在的底物上已预先建立三维基质细胞培养物，所述底物包括形成生理学上可接受的三维纤维网状物的非编织纤维基质，由此扩增/维持未分化的造血干细胞或祖细胞。

22.权利要求21的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞为从选自脐带血、流动的体循环血液和骨髓的组织中分离的细胞。

23.权利要求21的方法，其中所述未分化的造血干细胞或祖细胞和所述基质细胞培养物的基质细胞分享共同的HLA抗原。