[发明专利]从克隆的核苷酸序列制备减毒嵌合呼吸道合胞毒病毒

权利要求书

1.一种经分离的感染性嵌合呼吸道合胞病毒(RSV)，该病毒含有主要核壳(N)蛋白、核壳磷蛋白(P)、大聚合酶蛋白(L)、RNA聚合酶延伸因子以及一个RSV毒株或亚型病毒的部分或完整RSV基因组或反基因组，它与不同RSV毒株或亚型病毒的异源基因或基因片段结合形成嵌合RSV基因组或反基因组。

2.权利要求1的嵌合RSV，其中嵌合基因组或反基因组含有与来自不同的人或非人RSV亚型或毒株的异源基因或基因片段相结合的一个RSV亚型或毒株的部分或完整的人RSV基因组或反基因组。

3.权利要求2的嵌合RSV，其中异源基因或基因片段来自人RSV亚型A、人RSV亚型B、牛RSV或鼠RSV。

4.权利要求1的嵌合RSV，其中异源基因或基因片段选自NS1、NS2、N、P、M、SH、M2(ORF1)、M2(ORF2)、L、F或G基因或者基因片段。

5.权利要求4的嵌合RSV，其中异源基因或基因片段编码RSVF、G或SH糖蛋白或者其细胞质结构域、跨膜结构域、胞外结构域或免疫原性抗原决定簇。

6.权利要求1的嵌合RSV，其中嵌合基因组或反基因组含有与来自人RSV B亚型病毒的异源基因或基因片段相结合的部分或完整的人RSV A亚型基因组或反基因组。

7.权利要求6的嵌合RSV，其中来自人RSV B的异源基因或基因片段编码RSV F、G或SH糖蛋白或者其细胞质结构域、跨膜结构域、胞外结构域或者免疫原性抗原决定簇。

8.权利要求6的嵌合RSV，其中人RSV B亚型糖蛋白基因F、G和SH中的一个或多个或其细胞质结构域、跨膜结构域、胞外结构域或者免疫原性抗原决定簇被替换到RSV A基因组或反基因组中。

9.权利要求8的嵌合RSV，其中用人RSV B亚型糖蛋白基因F和G中的一个或二者替换RSV A基因组或反基因组中的对应F和G糖蛋白基因中的一个或二者。

10.权利要求9的嵌合RSV，其中用人RSV B亚型糖蛋白基因F和G两者替换RSVA基因组或反基因组中的对应F和G糖蛋白基因。

11.权利要求1的嵌合RSV，其中用第一异源基因或基因片段替换部分或完整RSV基因组或反基因组中的对应基因或基因片段，而第二异源基因或基因片段被添加到部分或完整RSV基因组或反基因组中，以形成嵌合RSV基因组或反基因组。

12.权利要求1的嵌合RSV，其中嵌合基因组或反基因组通过一个或更多的减毒突变而被进一步修饰。

13.权利要求12的嵌合RSV，其中，嵌合基因组或反基因组含有存在于一组生物学上获得的突变RSV毒株中的至少一个至全部的减毒突变，所述一组突变株包括cpts RSV 248(ATCC VR 2450)、cpts RSV248/404(ATCC VR 2454)、cpts RSV 248/955(ATCC VR 2453)、cptsRSV 530(ATCC VR 2452)、cpts RSV 530/1009(ATCC VR 2451)、cptsRSV 530/1030(ATCC VR 2455)、RSV B-1 cp52/2B5(ATCC VR 2542)和RSV B-1 cp-23(ATCC VR 2579)。

14.权利要求12的嵌合RSV，其中嵌合基因组或反基因组含有至少一个至全部的减毒突变，这些减毒突变导致RSV聚合酶基因LPhe₅₂₁、Gln₈₃₁、Met₁₁₆₉或Tyr₁₃₂₁位的温度敏感性氨基酸替换，或者基因M2的基因起始序列中的温度敏感性核苷酸替换。

15.权利要求12的嵌合RSV，其中嵌合基因组或反基因组含有来自冷传代减毒RSV的至少一个到全部的突变，所述突变包括导致RSV N基因Val₂₆₇、RSV F基因的Glu₂₁₈或Thr₅₂₃、RSV聚合酶基因L的Cys₃₁₉或者His₁₆₉₀上的氨基酸替换的突变。