[发明专利]含有已改变的转录起始序列的副粘病毒

说明书

                        技术领域

本发明涉及副粘病毒科的含有被改变之转录起始序列的重组病毒。

                        背景技术

副粘病毒具有一条作为基因组的非分节段型负链RNA。该基因组中编码了6个基因，并且通常每一个基因连接一个短序列(E-IG-S信号)。这些信号序列是高度保守的，特别是在属中和科中，在指定病毒种的基因间更是高度保守(Feldmann，H.E.等，1992，Virus Res.24：1-19)。

仙台病毒(SeV)，被分类为副粘病毒科中的呼吸道病毒，是一种有包膜的非分节段型负链RNA病毒，该病毒被认为是副粘病毒亚科的原型。SeV基因组的长度是15384个碱基，起始于一个短的3’前导区，接下来是编码N(核衣壳)、P(磷酸)、M(基质)、F(融合)、HN(血凝素-神经氨酸酶)和L(大)蛋白的6个基因，终止于一个短的5’尾随区。除了P蛋白以外，第二个基因还通过一种已知为共转录编辑的方法(其插入了一个原本不包含在模板中的G残基)(Park，K.H.和M.Krystal，1992，J.Virol.66：7033-7039；Paterson，R.G.和R.A.Lamb，1990，J.Virol.64：4137-4145；Thomas，S.M.等，1988，Cell，54：891-902；Vidal，S等，1990，J.Virol.64：239-246)并分别通过两种翻译起始(Gupta，K.C.和E.Ono，1997，Biochem.J.321：811-818；Kuronati，A等，1998，Genes Cell.3：111-124)而表达V和C辅助蛋白。该基因组与N蛋白紧密结合，形成一种螺旋状核糖核蛋白(RNP)复合体。该RNP，而非裸露的RNA，是转录和复制的模板(Lamb，R.A.和D.Kolakofsky，1996，副粘病毒科：病毒和它们的复制.1177-1204页.在Fields Virology，第三版中.Fields，B.N.，D.M.Knipe和P.M.Howley等(编)，Raven出版社，纽约，N.Y.)。在3’端针对含有P和L蛋白的病毒聚合酶只有一个启动子(Hamaguchi，M.等，1983，Virology 128：105-117)。所述聚合酶通过识别位于每一基因边界的短而保守的转录终端(E)序列和转录起始(S)序列而产生前导RNA和每一种mRNA(Glazier，K.等，1997，J.Virol.21：863-871)。在E序列和S序列之间存在一个不被转录的基因间三核苷酸序列(IG)(Gupta，K.C.和D.W.Kingsbury，1984，Nucleic Acids Res.12：3829-3841；Luk，D.等，1987，Virology 160：88-94)。由于在每一基因边界再起始转录的效率很高但不完美，所以由下游基因产生的转录物不如由上游基因产生的转录物多。因此，在被感染的细胞中每一种mRNA不是以等摩尔量合成，而是向5’端极性衰减式转录(Glazier，K.等，1997，J.Virol.21：863-871；Homann，H.E.等，1990，Virology177：131-140；Lamb，R.A.和D.Kolakofsky，1996，副粘病毒科：病毒和它们的复制.1177-1204页.在Fields Virology，第三版中.Fields，B.N.，D.M.Knipe和P.M.Howley等(编)，Raven出版社，纽约，N.Y.)。

翻译出mRNA和积累了翻译产物后，基因组进行复制。此时，相同的病毒RNA聚合酶利用相同的RNP模板进行复制，但在一定程度上忽略了每一种mRNA的E序列和S序列并且产生了全长反基因组正义(+)RNP(Lamb，R.A.和D.Kolakofsky，1996，副粘病毒科：病毒和它们的复制.1177-1204页.在Fields Virology，第三版中.Fields，B.N.，D.M.Knipe和P.M.Howley等(编)，Raven出版社，纽约，N.Y.)。聚合酶进入(+)RNP的3’端启动子以便生成基因组(-)RNP，该基因组(-)RNP作为下一轮转录和复制的模板。