[发明专利]用于多肽的表达和分泌的果胶酸裂解酶融合体无效

专利信息
申请号: 00808288.X 申请日: 2000-05-31
公开(公告)号: CN1353762A 公开(公告)日: 2002-06-12
发明(设计)人: 迈克尔·D·拉斯马森;马兹·E·比约恩瓦德;伊凡·迪尔斯 申请(专利权)人: 诺维信公司
主分类号: C12N15/62 分类号: C12N15/62;C12N15/75;C07K19/00;//C12N9/26C07K14/605C07K14/62
代理公司: 北京市柳沈律师事务所 代理人: 巫肖南,黄益芬
地址: 丹麦*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 用于 多肽 表达 分泌 果胶 裂解 融合
【权利要求书】:

1.一种细胞,其包含一种能编码依次融合在一个开放读码框内的至少以下元件的DNA序列,所述元件有果胶酸裂解酶,用于蛋白酶剪切的靶位点,和外源多肽。

2.一种细胞,其包含一种能编码依次融合在一个开放读码框内的至少以下元件的DNA序列,所述元件有果胶酸裂解酶,含至少2个氨基酸的接头,用于蛋白酶剪切的靶位点,和外源多肽。

3.权利要求1或2的细胞,其中所述细胞为革兰氏阳性微生物细胞。

4.权利要求1-3中任一项的细胞,其中所述细胞为芽孢杆菌细胞。

5.权利要求1-4中任一项的细胞,其中所述细胞选自地衣芽孢杆菌、Bacillus clausii、短芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、凝固芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、和Bacillus agaradhaerens。

6.权利要求1-5中任一项的细胞,其中所述用于蛋白酶剪切的靶位点是由蛋白酶识别并切割的氨基酸序列。

7.权利要求6的细胞,其中所述用于蛋白酶剪切的靶位点是氨基酸序列Lys-Arg(KR)。

8.权利要求6的细胞,其中所述用于蛋白酶剪切的靶位点是氨基酸序列Ile-Glu-Gly-Arg(IEGR)。

9.权利要求1-5中任一项的细胞,其中所述用于蛋白酶剪切的靶位点是当所融合的多肽被所述细胞分泌时被切割的氨基酸序列。

10.权利要求1-5中任一项的细胞,其中所述用于蛋白酶剪切的靶位点是能被化学化合物切割的氨基酸序列。

11.权利要求10的细胞,其中所述化学化合物是溴化氰或羟胺。

12.权利要求1-11中任一项的细胞,其中所述果胶酸裂解酶选自以下果胶酸裂解酶,这些酶含有选自SEQ ID 2、SEQ ID 4、SEQ ID 6、SEQ ID 8、和SEQID 10的氨基酸序列。

13.权利要求1-12中任一项的细胞,其中所述果胶酸裂解酶是一种同系物,其与含有选自SEQ ID 2、SEQ ID 4、SEQ ID 6、SEQ ID 8、和SEQ ID10的氨基酸序列的果胶酸裂解酶具有70%的氨基酸序列相似性。

14.权利要求2-13中任一项的细胞,其中出现在接头中的氨基酸残基至少25%为脯氨酸。

15.权利要求2-14中任一项的细胞,其中所述接头依次包含氨基酸的至少一个循环重复:Pro-Glu-Pro-Thr,Glu-Pro-Thr-Pro,Pro-Thr-Pro-Glu,或Th-Pro-Glu-Pro(PEPT,EPTP,PTEP,或TPEP)。

16.权利要求2-13中任一项的细胞,其中所述接头包含氨基酸序列Ile-Glu-Gly-Arg(IEGR)的至少一个重复。

17.权利要求1-16中任一项的细胞,其中所述外源多肽选自激素,功能型激素类似物,酶和人工多肽。

18.权利要求1-16中任一项的细胞,其中所述外源多肽为包含SEQ ID12中350-834位所示氨基酸序列的α-淀粉酶。

19.权利要求1-16中任一项的细胞,其中所述外源多肽为包含SEQ ID14中348-378位或SEQ ID 16中356-386位所示氨基酸序列的人类GLP-1(7-37)激素类似物。

20.权利要求1-16中任一项的细胞,其中所述外源多肽为包含SEQ ID18中所示氨基酸序列的单链人类胰岛素(MI3)。

21.权利要求1-16中任一项的细胞,其中所述外源多肽包含含有SEQID 20中356-408位所示氨基酸序列的单链人类胰岛素(MI3)。

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