[发明专利]VLA－1的单克隆封闭抗体及其在炎性病症的治疗中的应用

说明书

                       发明背景

整合素是细胞表面蛋白复合物，它们构成一大类能介导细胞彼此间以及与它们的周围环境之间的粘附的细胞表面分子。细胞在多种发育和生理过程中需要彼此粘附并与它们的周围环境中的其它分子粘附。实例包括组织和器官的产生以及它们的完整性的维持。这些生理过程中就包括炎性病症。

炎性过程中的关键步骤之一涉及细胞渗出血管，进入组织，和向感染部位移动。粘附分子在该过程中的作用常常被分割为一种三步骤模式，首先为白细胞在发炎的内皮上“滚动”，然后牢牢附着，使白细胞穿过内皮移动至发炎的组织(Hynes，R.O.，1992细胞69：11-25；Springer，T.A.，1992细胞76：301-314)。炎性连锁反应中的另一关键步骤，以及尚未得到深入探索的一个步骤，发生在外周组织中，在这里，浸润细胞以及固有细胞需要移动至感染部位，识别外来抗原，然后进行细胞活化以便实施它们的效应功能。为了直接评估间质粘附作用在炎症中的重要性，并与粘附作用在白细胞补充(recruitment)中的作用相区别，我们主要关注整合素家族的粘附分子和它们的片段的重要性，以及它们在炎症的动物模型，尤其关节炎模型中的作用。

                         发明简述

本发明提供了治疗受试者的炎性病症的方法。具体地，本发明提供了治疗关节炎的方法。

更具体地，本发明提供了治疗受试者中炎性病症的方法，该方法包括给与所述受试者一种药用组合物，其包含有效量的α1β1功能封闭抗体或该抗体的片段，其中所述α1β1功能封闭抗体或片段能与VLA-1上包含氨基酸残基92-97，即Val-Gln-Arg-Gly-Gly-Arg的表位结合。

抗整合素抗体可选自人类抗体、嵌合抗体、人源化抗体和它们的片段。抗整合素抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

本发明还提供治疗人或动物受试者的炎性病症的方法。

以上部分所引用的所有文献，以及后文公开的引用文献，均在此引入作为参考。

                         附图说明

图1.活化的白细胞上的胶原蛋白结合型整合素α1β1和α2β1。(A)对IL-2活化型脾细胞(第11天)上α1和α2β1整合素表达的流式细胞仪分析。细胞用抗α1mAb，抗α2mAb，或非结合型对照mAb标记(灰线)，然后用FITC-抗仓鼠免疫球蛋白标记。(B)抗α1和抗α2mAb对白细胞与胶原蛋白的粘附的影响。将105个IL-2活化的脾细胞用所述mAb处理15分钟，然后铺板至IV型或I型胶原蛋白包被孔中，37℃1小时。如实施例1所述计算粘附，表示为相对于对照mAb所处理细胞的粘附百分比。粘附试验一式3份，至少进行3个独立的实验。图中显示了一个代表实验。

图2.抗整合素mAb对迟发型超敏反应效应期的影响。SRBC致敏的小鼠腹膜内(i.p.)注射所述mAb，1小时后进行SRBC攻击。抗原攻击的20小时后测量足垫厚度，结果表示为如实施例2所述的％足垫厚度增加值±SEM。这些数据代表总共8个试验，其中n＝79(PBS)，68(对照仓鼠Ig)，68(抗-α1)，29(抗-α2)，18(抗-α1+抗-α2)，45(抗-α4)，18(抗-α5)，20(抗-α6)，和10(抗-β1)。所用mAb为：Ha4/8(对照仓鼠的第二组免疫球蛋白)，Ha31/8(抗-α1)，Ha1/29(抗-α2)，PS/2(抗-α4)，5H10-27(抗-α5)，GoH3(抗-α6)，和HMβ1-1(抗-β1)。

图3.抗整合素mAb对接触性超敏反应效应期的影响。FITC致敏的小鼠腹膜内注射所述mAb，4小时后进行FITC攻击。在起点和24小时后测量耳的厚度，结果表示为如实施例3所述的％耳厚度增加值±SEM。这些数据代表总共9个试验，其中n＝74(PBS)，60(对照仓鼠Ig)，26(抗-ICAM-1)，44(抗-α1)，44(抗-α2)，38(抗-α1+抗-α2)，36(抗-α4)，16(抗-α5)，26(抗-α4+抗-α5)，24(抗-α6)，和22(抗-β1)。所用仓鼠mAb为：Ha4/8(对照仓鼠的第二组免疫球蛋白)，Ha31/8(抗-α1)，Hal/29(抗-α2)，HMβ1-1(抗-β1)，3E2(抗-ICAM-1)；所用大鼠mAb为R35-95和R35-38(分别为对照大鼠IgG2a和大鼠IgG2b)，PS/2(抗-α4)，5H10-27(抗-α5)，GoH3(抗-α6)。