[发明专利]包含皂甙和免疫刺激寡核苷酸的佐剂组合物

说明书

本发明涉及用于疫苗的新型佐剂组合物。具体来说，本发明佐剂组合物包含组合的皂甙和免疫刺激寡核苷酸，所述组合还任选包含载体。本发明还提供包含本发明佐剂组合物和至少一种抗原的疫苗。还提供生产本发明佐剂组合物和疫苗的方法及其用作药物的用途。此外，本发明提供通过胃肠外或粘膜给予本发明疫苗治疗疾病易感个体或患病个体的方法。

本领域已知含未甲基化的CpG二核苷酸(“CpG”)的免疫刺激寡核苷酸当通过系统和粘膜途径给予时用作佐剂(WO 96/02555，EP468520，Davis等，J.Immunol，1998，160(2)：870-876；McCluskie和Davis，J.Immunol.，1998，161(9)：4463-6)。CpG是DNA中存在的胞嘧啶-鸟苷二核苷酸基元的缩写。从前观测到BCG的DNA部分能够发挥抗肿瘤作用。在进一步的研究中，证实得自BCG基因序列的合成寡核苷酸能够诱导免疫刺激作用(在体外和体内)。这些研究的作者的结论是：某些回文序列，包括中央的CG基元，具有这种免疫刺激活性。后来，Krieg在Nature 374，p546 1995中发表文章阐明了CG基元在免疫刺激中的主要作用。详细的分析证实，CG基元必须处于一定的序列环境中，而且这种序列是细菌DNA中的常见序列，但是在脊椎动物DNA中非常罕见。免疫刺激序列通常为：嘌呤、嘌呤、C、G、嘧啶、嘧啶；其中所述二核苷酸CG基元是未甲基化CG基元，但是已知其它未甲基化CpG序列是免疫刺激序列而且可用于本发明。

在所述6个核苷酸的某些组合中存在回文序列。在同一个寡核苷酸中可存在若干个这种基元，或者为重复的一个基元或组合的不同基元。含一个或多个这样的免疫刺激序列的寡核苷酸可激活不同免疫亚组细胞，包括天然杀伤细胞(它产生γ干扰素而且具有裂解细胞活性)和巨噬细胞(Wooldrige等，第89卷(第8期)，1977)。尽管目前证实不具有该共有序列的含其它未甲基化CpG的序列是免疫调节序列。

当CpG配制成疫苗时，一般以自由溶液和自由抗原一起(WO96/02555；McCluskie和Davis，同上)或者与抗原共价结合(PCT公布号WO 98/16247)或者用载体如氢氧化铝配制后((肝炎表面抗原)Davis等，同上；Brazolot-Millan等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1998，95(26)，15553-8)给予。

在Lacaille-Dubois，M和Wagner H(1996，关于皂甙的生物和药理活性的综述。Phytomedicine第2卷第363-386页)中介绍了皂甙。皂甙是广泛分布于植物和海洋动物的类固醇糖苷或三萜烯糖苷。皂甙因为形成胶体水溶液以及沉淀胆固醇而引起人们的注意，所述胶体水溶液振荡时形成泡沫。当皂甙接近细胞膜时，它们在膜上形成孔样结构，引起细胞膜破裂。红细胞溶血就是这种现象的一个实例，它是某些皂甙但是不是所有皂甙的一个特性。

已知皂甙用作系统给予疫苗的佐剂。本领域深入研究了各种皂甙的佐剂活性和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner，同上)。例如US5,057,540和“皂甙用作疫苗佐剂”，Kensil，C.R.，Crit Rev Ther DrugCarrier Syst，1996，12(1-2)：1-55和EP 0 362 279 B1介绍了Quil A(从南美洲的树Quillaja Saponaria Molina树皮分离制得)及其部分。包含QuilA部分的颗粒结构称为免疫刺激复合物(ISCOMS)，它具有溶血活性，而且已经将其用于生产疫苗(Morein，B.，EP 0 109 942 B1)。据报道这些结构具有佐剂活性(EP 0 109 942 B1；WO 96/11711)。

溶血性皂甙QS21和QS17(HPLC纯化的Quil A部分)被描述为有效系统佐剂，美国专利号5,057,540和EP 0 362 279 B1公开了其生产方法。这两种参考文献还介绍了用作系统疫苗有效佐剂的QS7(Quil-A的非溶血性部分)的作用。Kensil等(1991，J.Immunology第146卷，431-437)还介绍了QS21的作用。QS21和聚山梨酯或环糊精的组合是已知的(WO 99/10008)。WO 96/33739和WO 96/11711介绍了包含部分QuilA如QS21和QS7的颗粒性佐剂系统。