[发明专利]肝素结合蛋白在重组哺乳动物细胞中的表达

权利要求书

1、一种在哺乳动物细胞中产生肝素结合蛋白的方法，所述细胞在导入了编码所述肝素结合蛋白的核酸后可在厌养条件下培养，其中所述方法包括

(a)将编码所述肝素结合蛋白的核酸导入上述细胞；

(b)在能诱导所述HBP表达的条件下培养步骤(a)的细胞；以及

(c)从该培养液回收所述HBP。

2、如权利要求1所述的方法，其中哺乳动物肝素结合蛋白是人源或猪源HBP。

3、如权利要求1所述的方法，其中回收自培养基的HBP具有与SEQ IDNO：1或2，或其等位基因变体或天然变体的氨基酸序列至少约80％同一性的氨基酸序列。

4、如权利要求1所述的方法，其中将与SEQ ID NO：3、4、5、7、9或11所示核酸序列；(ii)其互补链，或(iii)(a)或(b)的亚序列杂交的核酸序列导入所述哺乳动物细胞。

5、如权利要求1所述的方法，其中从培养基回收的HBP具有SEQ IDNO：1或2所示氨基酸序列。

6、如权利要求1所述的方法，其中将SEQ ID NO：3、4、5、7、9或11所示核酸序列导入所述哺乳动物细胞。

7、如权利要求1所述的方法，其中所述核酸序列编码以信号序列为先导的成熟HBP。

8、如权利要求1所述的方法，其中步骤(a)的细胞包括编码肝素结合蛋白前序列和成熟的肝素结合蛋白的核酸序列，其中编码N末端延伸的肝素结合蛋白的核酸序列包括编码蛋白酶酶切位点的核酸序列，该位点位于编码N末端延伸的核酸序列与编码成熟的肝素结合蛋白的核酸序列之间。

9、如权利要求7所述的方法，其还包括裂解N末端延伸的HBP以获得成熟的HBP。

10、如权利要求1所述的方法，其中步骤(a)的细胞含有编码肝素结合蛋白信号序列，肝素结合前序列，成熟的肝素结合蛋白的核酸序列以及编码蛋白酶酶切位点的核酸序列，该位点位于编码肝素结合蛋白前序列的核酸序列与编码成熟的肝素结合蛋白的核酸序列之间。

11、如权利要求9所述的方法，其还包括裂解N末端延伸的HBP以获得成熟的HBP。

12、如权利要求1所述的方法，其中宿主细胞为腺病毒转化型细胞。

13、如权利要求1所述的方法，其中宿主细胞为胚衍生的细胞。

14、如权利要求1所述的方法，其中宿主细胞为人胚肾细胞。

15、如权利要求1所述的方法，其中宿主细胞为人胚肾293细胞。

16、如权利要求1所述的方法，进一步包括纯化所述肝素结合蛋白。

17、产生所述哺乳动物HBP的方法，其包括：(a)将编码HBP的核酸导入哺乳动物宿主细胞，这些细胞可在导入了所述核酸后在厌氧条件下培养；(b)选择包含编码所述肝素结合蛋白的核酸的步骤(a)的哺乳动物宿主细胞；(c)在无血清并任选无蛋白的培养基上培养所述宿主细胞；(d)分离所述HBP。

18、如权利要求16所述的方法，其进一步包括纯化所述肝素结合蛋白。

19、一种重组哺乳动物宿主细胞，其在导入了编码哺乳动物肝素结合蛋白的核酸后可在厌氧条件下培养，所述细胞包含编码所述肝素结合蛋白的核酸序列。

20、如权利要求18所述的重组哺乳动物宿主细胞，其中所述核酸序列编码人HBP。

21、如权利要求18所述的重组哺乳动物宿主细胞，其中所述核酸序列编码以信号序列为先导的成熟HBP。

22、如权利要求18所述的重组哺乳动物宿主细胞，其中该重组宿主细胞为人胚肾293细胞。