[发明专利]抗除草剂植物

权利要求书

1.含有SEQ ID No.41.中所描述序列的一种分离的多核苷酸。

2.一种编码EPSPS的多核苷酸，不包括编码水稻和玉米EPSPS的cDNA，上述多核苷酸与一种序列互补，该序列在含有0.1％SDS的0.1强度的柠檬酸盐缓冲液中65-70℃之间温育，然后用含有0.1％SDS的0.1强度的柠檬酸盐缓冲液在同样温度洗涤时，仍然与SEQ ID NO.41中所描述的序列杂交。

3.一种编码EPSPS的多核苷酸，该多核苷酸可以通过用组成SEQID NO.41序列内的内含子的核苷酸筛选植物基因组DNA文库而得到。

4.一种分离的多核苷酸，该多核苷酸含有编码叶绿体转运肽以及编码该肽3’的抗草甘膦的5-烯醇丙酮酸莽草酸磷酸酯合酶(EPSPS)的区域，上述区域处于一种植物可操作启动子的表达调控之下，前提为上述启动子与上述区域不是异源的，并且叶绿体转运肽与上述合酶不是异源的。

5.根据权利要求1到4中任何一项的一种多核苷酸，在5’到3’的转录方向中包括以下组分：

(i)至少一个转录增强子，其增强区处于序列转录起始位点上游，该序列为增强子从其所获得的序列，并且上述增强子自身不作为启动子起作用，不论作为内源所含有的序列中，还是作为构建体的一部分而异源存在时；

(ii)源自水稻EPSPS基因的启动子；

(iii)编码水稻EPSPS叶绿体转运肽的水稻基因组序列；

(iv)编码水稻EPSPS的基因组序列；

(v)转录终止子；

其中水稻EPSPS编码序列被改造，以便使一个第1位置被突变，从而该位置的残基为Ile而不是Thr，以及使一个第2位置被突变，从而该位置的残基为Ser而不是Pro，突变被引入到在野生型酶中含有以下保守序列GNAGTAMRPLTAAV的EPSPS基因中从而使改造后的序列为GNAGIAMRSLTAAV。

6.根据权利要求5的多核苷酸，其中上述增强子包含一个序列，该序列的3’末端位于增强子所来自的序列的最接近的转录起始位点上游的至少40个核苷酸。

7.根据权利要求5或6中任何一项的一种多核苷酸，其中增强子含有一个区域，该区域的3’末端处于上述最接近的起始位点上游至少60个核苷酸。

8.根据权利要求5的一种多核苷酸，其中上述增强子含有一个序列，该序列的3’末端处于增强子所来自的序列的TATA共有序列的第一个核苷酸的上游至少10个核苷酸。

9.根据权利要求1-8中任何一项的多核苷酸，含有第一或第二转录增强子。

10.根据权利要求9的多核苷酸，其中第一和第二增强子以串连的方式存在于多核苷酸。

11.根据权利要求1-10中任何一项的多核苷酸，其中增强子的3’末端，或第一个增强子的3’末端，处于相应于EPSPS转运肽转录起始位点的密码子的上游大约100到大约1000个核苷酸，或者处于5’非翻译区的内含子的第一个核苷酸的上游大约100到大约1000个核苷酸。

12.根据权利要求1-11中任何一项的多核苷酸，其中增强子的3’末端，或第一个增强子的3’末端，处于相应于EPSPS转运肽转录起始位点的密码子的上游，或者处于5’非翻译区的内含子的第一个核苷酸的上游，大约150到大约1000个核苷酸。

13.根据权利要求1-12中任何一项的多核苷酸，其中增强子的3’末端，或第一个增强子的3’末端，处于相应于EPSPS转运肽转录起始位点的密码子的上游，或者处于5’非翻译区的内含子的第一个核苷酸的上游，大约300到950个核苷酸。

14.根据权利要求1-13中任何一项的多核苷酸，其中增强子的3’末端，或第一个增强子的3’末端，处于相应于EPSPS转运肽转录起始位点的密码子的上游，或者处于5’非翻译区的内含子的第一个核苷酸的上游，大约70和大约790个核苷酸。

15.根据权利要求1-13中任何一项的多核苷酸，其中增强子的3’末端，或第一个增强子的3’末端，可以处于相应于EPSPS转运肽转录起始位点的密码子的上游，或者处于5’非翻译区的内含子的第一个核苷酸的上游，大约300到大约380个核苷酸。