[发明专利]源自白斑综合征病毒的蛋白质及其应用

说明书

                        技术领域

本发明涉及源自白斑综合征病毒的蛋白质，编码上述蛋白质的核酸序列，以及所述蛋白质在制备用于预防和/或治疗甲壳动物白斑综合征(White Spot Sydrone)的疫苗中的应用。

                        背景技术

白斑综合征病毒(WSSV)在东南亚大部分地区的虾中是一个主要的病毒性疾病。该病毒在甲壳动物中有很宽的宿主范围(Flegel，1997)，而且在各个隔离群之间只有很小的遗传变异(Lo等，1999)。电子显微镜术(EM)研究显示病毒颗粒有包膜，呈杆状到弹头样外观，长度大约275nm，宽大约120nm，在一端有一个尾样附件。失去包膜的核壳呈交叉网格型外观，大小约300nm×70nm(Wongteerasupaya等，1995)。这个病毒颗粒的形态学，它的核定位和它的形态发生学令人想起昆虫中的杆状病毒(Durand等，1997)。本来白斑综合征病毒被分类作为杆状病毒科的一个未指定成员(Francki等，1991)，因此该病毒曾经被称做系统性外中胚层杆状病毒(SEMBV)或白斑杆状病毒(WSBV)。目前由于缺乏分子数据，白斑综合征病毒不再被纳入这个科(Murphy等，1995)。限制性核酸内切酶分析显示其病毒的双链DNA大小超过200kb(Yang等，1997)。

白斑综合征病毒的暴发在东南亚的养殖虾中会引起虾群的大规模死亡。该疾病的特征是虾的甲壳、附肢和角皮出现白斑，肝胰腺呈淡红色。被感染的虾显示嗜睡、进食迅速减少等征候，在3到5天内这些虾就会死亡。白斑综合征病毒的暴发导致虾养殖工业的严重损失，因而强烈需要一种能对白斑综合征病毒的感染具有保护作用的疫苗。能在这样的疫苗中使用的白斑综合征病毒主要结构蛋白质的鉴定和表征能够为发展这种疫苗提供方法。

                    本发明的公开

四种主要白斑综合征病毒蛋白质VP28(28kDa)、VP26(26kDa)、VP24(24kDa)和VP19(19kDa)已经被鉴定出来，其分子量是根据它们在考马斯亮蓝染色的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中的迁移率来估计的。VP26和VP24是核壳蛋白质，而VP28和Vp19是包膜蛋白质。白斑综合征病毒蛋白质的氨基端(N端)氨基酸残基已通过蛋白质测序获得，并用来鉴定白斑综合征病毒基因组上的那些基因(分别是vp28，vp26，vp24，vp19)。如图2b所述，vp26的可读框(ORF)包含555个核苷酸(SEQ ID No：1)，推导的VP26氨基酸序列含有184个氨基酸残基(SEQ ID No：3)，也一同描述在图2b中。vp26的一个第二个可读框包含612个核苷酸，显示于SEQ ID No：9，推导出其氨基酸序列含有204个氨基酸残基，它被单独描述为SEQ IDNo：10。vp28的可读框包含615个核苷酸(SEQ ID No：2)，在图2c中与被推导出的氨基酸序列(SEQ ID No：4)一起被描述。被推导出的VP28的氨基酸序列含有204个氨基酸。VP26和VP28都含有一个位于N端的假定的穿膜区和许多假定的N-和O-糖基化位点。vp26和vp28基因的可读框分别编码理论大小为20kDa和22kDa的蛋白质。VP26和VP28的理论上的氨基酸序列被直接的蛋白质测序确认。VP26和VP28理论上的大小与根据它们在考马斯亮蓝染色的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中的迁移率而测得的大小相差6kDa，这个大小差异可以被翻译后修饰作用：例如糖基化、磷酸化等来解释。VP24的N末端氨基酸序列和VP19的部分氨基酸序列分别被描述为SEQ ID No：5和6。vp24的完整可读框包含627个核苷酸，描述于SEQ ID No：11，与被推导出的VP24氨基酸序列一起被描述；推导出的VP24氨基酸序列有208个残基，单独描述于SEQ ID No：12。四个蛋白质和它们各自的核苷酸序列是白斑综合征病毒所特有的。