[发明专利]粘膜炎莫拉氏菌BASB114多肽抗原及其用途

说明书

                       发明领域

本发明涉及多核苷酸(本文中称“BASB114多核苷酸”)、它们编码的多肽(本文中称“BASB114”或“BASB114多肽”)、重组物质以及它们的制备方法。在另一个方面，本发明涉及使用这种多肽和多核苷酸包括抵抗细菌感染的疫苗的方法。再一方面，本发明涉及检测某些病原体感染的诊断试验。

                       发明背景

粘膜炎莫拉氏菌(粘膜炎布兰汉氏球菌)是一种能经常从人的上呼吸道分离到的革兰氏阴性细菌。它导致几种疾病，主要是婴幼儿中耳炎和老年人肺炎。它也引起鼻窦炎和医院内感染，偶尔还会引起侵袭性疾病。

中耳炎从病例数量和其后遗症来讲是重要的儿童疾病。在美国年发病350万例以上，据估计80％的儿童在3岁之前会罹患中耳炎至少一次(Klein，JO(1994)Clin.Inf.Dis.，19：823)。如未得到治疗或转为慢性，会导致暂时(中耳积液时)或永久(听神经损害)的听力丧失。在婴儿中，这种听力丧失会导致说话延迟。

从患有中耳炎的儿童中耳分离的菌株主要有三种：肺炎链球菌、非典型性流感嗜血杆菌(NTHi)和粘膜炎莫拉氏菌。它们在60％到90％的病例中存在。近期研究表明，中耳炎病例中，肺炎链球菌和非典型性流感嗜血杆菌均占约30％，粘膜炎莫拉氏菌约占15％(Mruphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60：267)。从中耳中也可分离到其它细菌(B型流感嗜血杆菌、酿脓链球菌等)，但频度低得多(2％或更低)。

流行病数据显示，中耳中发现的病原体引起中耳炎必需首先定居在上呼吸道；但是，发病还必需有其它因素(Dickinson，DP et al.(1988)J.Infect.Dis.，158：205，Faden，HL et al.，(1991)Ann.Otorhinol.Laryngol.100：612)。这对引起细菌经咽鼓管迁移到中耳然后开始炎症至关重要。这些因素迄今仍不清楚。据推测，诸如病毒感染后免疫系统暂时性异常可能引起不能控制呼吸道定居(Faden，HL et al(1994)J.Infect.Dis.169：1312)。另一种解释是，暴露于环境因素之下使某些儿童中更为重要的定居得以发生，而这些儿童因为中耳中持续存在病原体而对中耳炎更为敏感(Murphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60：267)。

对粘膜炎莫拉氏菌的免疫应答知之甚少。按时从0到2岁的幼儿鼻咽分离的菌株的分析表明，他们经常获得和清除新菌株。这表明在细菌定居的儿童中建立了针对该细菌的有效免疫应答(Faden，HL et al(1994)J.Infect.Dis.169：1312)。

在大部分测试的成人中鉴定到了杀菌抗体(Chapman，AJ et al.(1985)J.Infect.Dis.151：878)。粘膜炎莫拉氏菌不同菌株抵抗血清杀菌活性的能力存在差异：一般，从患病个体中分离的菌株较仅仅携带该细菌的个体分离的菌株的抗性更强(Hol，C et al(1993)Lancet341：1281，Jordan，KL et al.(1990)Am.J.Med.88(suppl.5A)：23S)。血清抗性因此可以被认为是细菌毒力因子。中耳炎病愈后的儿童血清中可以见到调理活性。

除了OMP B1、UspA1和UspA2(Chen D.et al.(1999)，Infect.Immuno.67：1310)外，人体中这些不同的免疫应答针对的抗原尚未鉴定，OMP B1是一种84kDa的蛋白，其表达受铁调控，可以被肺炎患者血清识别(Sethi，S，et al.(1995)Infect.Immuno.63：1516)。

粘膜炎莫拉氏菌表面存在的一些其它膜蛋白已经使用生化方法鉴定，或者揭示了他们在诱导保护性免疫中的潜在意义(综述见Murphy，TF(1996)Microbiol.Rev.60：267)。在小鼠肺炎模型中，针对其中的一些成员(UspA，copB)的抗体的存在有利于迅速清除肺炎感染。另一种多肽(OMP CD)在粘膜炎莫拉氏菌菌株中高度保守，与铜绿假单胞菌的孔蛋白具有同源性，而后者已被证实对动物模型中的该细菌有效。