[发明专利]在无RNA酶和有机溶剂的条件下应用切向流过滤来纯化质粒DNA的方法

权利要求书

1.一种从含有质粒DNA的原核细胞中纯化该质粒DNA的方法，其包括下述步骤：

(a)消化所述细胞；

(b)在不对RNA进行酶促消化的前提下，将这些细胞培养约4到24小时，以便实施裂解和溶解；

(c)除去细胞裂解物的杂质，以获得一种质粒DNA溶液；

(d)使所述溶液流经切向流过滤装置而过滤，获得含有质粒DNA的回流液；

(e)收集这种回流液。

2.权利要求1所述方法，其中所述细胞是细菌细胞。

3.权利要求1所述方法，其中所述细胞是大肠杆菌的细胞。

4.权利要求1所述方法，其中所述质粒DNA的大小为大约2到50kb。

5.权利要求1所述方法，其中步骤(a)采用溶菌酶进行。

6.权利要求1所述方法，其中步骤(b)进行约10到24小时。

7.权利要求1所述方法，其中步骤(b)进行约20到24小时。

8.权利要求1所述方法，其中所述培养步骤在碱性条件下进行。

9.权利要求1所述方法，其中所述培养步骤在洗涤剂存在的条件下进行。

10.权利要求8所述方法，其中所述培养步骤在洗涤剂存在的条件下进行。

11.权利要求9所述方法，其中所述洗涤剂是离子型的。

12.权利要求11所述方法，其中所述洗涤剂是阴离子型的。

13.权利要求12所述方法，其中所述洗涤剂是十二烷基磺酸钠、胆酸、去氧胆酸。

14.权利要求1所述方法，其中步骤(c)通过离心使裂解物的杂质与质粒DNA分离，得到作为上清液的质粒DNA溶液。

15.权利要求1所述方法，其中所述过滤装置带有截留分子量大于约500kD的膜。

16.权利要求1所述方法，其还包括从回流液中回收质粒DNA。

17.权利要求1所述方法，还包括用一种缓冲液对所述回流液进行透析。

18.权利要求1所述方法，还包括对所述回流液进行离子交换层析。

19.一种组合物，其含有按照权利要求1的方法制备的质粒DNA。