[发明专利]PRV－1基因及其应用

说明书

描述

本发明涉及编码PRV-1基因的核苷酸序列，含有此核苷酸序列的重组DNA，含有该重组DNA的载体以及用这些载体转化的细胞，本发明还涉及PRV-1多肽，抗此多肽的抗体，检测PRV-1多肽的方法，以及包含PRV-1多肽或抗PRV-1多肽的抗体的药物。

红细胞增多症(Polycythaemia rubra vera)(erythraermia)也称为Polycythaemia vera或P-vera是一种恶性血液学疾病，其中红细胞、粒细胞和巨核细胞形成增加。该病起源于克隆并且其是由单个造血前体细胞突变所致。在德国，红细胞增多症的发生率为每100万居民中4到6人。如果不进行治疗，该病会在18个月内导致死亡。用放血法或化疗治疗会平均延长13年以上存活时间。

红细胞增多症由临床指标诊断，临床迹象包括在三分之二患者中有头痛、搔痒、脾大，在二分之一患者中有出血或血栓、高血压，由尿酸产量升高导致的痛风，以及在某些情况下出现脓毒性溃疡。最重要的实验室发现是血红蛋白、血细胞比容、红细胞计数和总红细胞容积值升高，且在许多情况下出现嗜中性粒细胞增多或血小板增多症。因为一方面多数指标相当模糊，另一方面不是所有患者均出现这些指标，因此通常很难将红细胞增多症与其它骨髓增生性疾病如慢性粒细胞白血病或特发性血小板增多症区分开来，因此不能保证诊断正确性。目前，红细胞增多症的分子学病因完全未知。但是因为如果不进行治疗红细胞增多症将发展成严重病程，因此精确诊断是非常重要的。

因此，本发明的目的是发现红细胞增多症的分子学病因，并且提供诊断该病的可能性。

本发明目的是通过分离一种基因而实现，该基因特异地与红细胞增多症相关表达，而在健康对照个体中不表达。这一基因称为PRV-1基因(polycythaemia rubra vera)。

类似的核苷酸序列已在国际申请WO98/50552中公开。

因此，本发明的一方面涉及编码PRV-1基因的多核苷酸，其基本上包含SEQ ID NO.1的序列。本发明的多核苷酸可以是单链或双链DNA或RNA，如果是RNA，本领域技术人员清楚地知道核苷酸U可以代替核苷酸T存在。多核苷酸应理解为是指含有15个或更多个核苷酸的核酸。

本发明的核苷酸序列如图1所示。因此，本发明涉及相应于图1所示序列的多核苷酸，以及核苷酸序列显示微小差异的多核苷酸。在本发明含义内，微小差异是指序列中少数、优选不超过50个、特别优选不超过25个核苷酸可以被置换，但是该核苷酸序列编码的基因的功能不发生改变。本领域技术人员熟悉这一事实，即编码氨基酸的碱基三联体可以用编码相同氨基酸的另一个三联体置换。另外，较不重要的区域可被缺失和/或稍加突变。在一特定实施方案中，所述多核苷酸包含SEQ ID NO.1的36-1346位核苷酸，即PRV-1基因的编码区。另一实施方案包含SEQ ID NO.1的36-1262位核苷酸，这一区域预计编码PRV-1多肽的活性区。最后，本发明的多核苷酸也可包含SEQ ID NO.1的39-1346位、39-1262位或39-1238位核苷酸，从而编码起始甲硫氨酸的密码子不存在。一优选的实施方案是包含SEQ ID NO.1的99-1346位、99-1262位或99-1238位核苷酸的多核苷酸，其导致编码PRV-1多肽的信号肽的5’末端密码子不存在。

本发明的多核苷酸也可以是PRV-1基因的一个片段，通常片段具有多于100个核苷酸，但优选地多于300个核苷酸。片段也可用作引物或探针，特别是用于PCR；在此情况下，片段可以被截短以适合该目的。通常，引物长度为10-30个核苷酸，探针长度为15-50个核苷酸。

PRV-1基因是一种内源性基因，但是其在健康个体中的表达仅限于少数器官。正常情况下，其主要在造血器官即骨髓和胎肝中表达，在脾中弱表达，在心脏、肌肉、胰腺或肾中不表达。在红细胞增多症患者中，这一基因特别是在造血细胞中非常强地过表达。

PRV-1基因编码的蛋白质序列如图2所示，在所有表面分子的蛋白质序列中存在的并在正常情况下当蛋白质加工时被除去的信号肽以破折号(---)分开。蛋白质具有SEQ ID NO.2的序列。因此，本发明的另一方面为基本上纯化的具有SEQ ID NO.2的序列的多肽，或者具有SEQ ID NO.2的序列但缺少信号肽的多肽(即SEQID NO.2的22-437位氨基酸)。其它实施方案包括SEQ ID NO.2的1-409位、22-409位、1-401位或22-401位氨基酸(其可能是该蛋白质的活性区域)。