[发明专利]使用来自分化细胞的供体细胞或细胞核克隆猪以及多能猪的生成

权利要求书

1.克隆猪胎儿或活的子代的方法，包括：

a)在适合于形成核移植(NT)单位的条件下，将期望的分化猪细胞或细胞核嵌入任选去核的猪卵母细胞或卵裂球中；

b)若先前未除去，则由所述卵母细胞或卵裂球除去内源细胞核；

c)激活产生的NT单位；

d)任选培养所述NT单位；并

e)将所述任选培养的NT单位移植到宿主哺乳动物中，使之发育成猪胎儿或动物。

2.权利要求1的方法，其产生活的子代。

3.权利要求1的方法，其中在所述分化猪细胞或细胞核中插入、除去、或修饰期望的DNA，由此生成遗传改变的NT单位。

4.权利要求3的方法，还包括将胎儿发育成子代。

5.权利要求1的方法，其包括培养所述激活的核移植单位直至超过2细胞发育阶段。

6.权利要求1的方法，其中移植的NT单位是单细胞。

7.权利要求6的方法，其中移植是在激活的同一天进行的。

8.权利要求1的方法，其中在导入所述分化细胞或细胞核后将卵母细胞去核。

9.权利要求1的方法，其中分化细胞或细胞核是增殖中(非休眠)细胞的。

10.权利要求9的方法，其中所述分化细胞处于G₁、G₂、或M期。

11.权利要求1的方法，其中猪卵母细胞在体外成熟。

12.权利要求1的方法，其中猪卵母细胞在体内成熟。

13.权利要求1的方法，其中所述分化猪细胞或细胞核得自体细胞。

14.权利要求1的方法，其中所述分化猪细胞或细胞核得自生殖细胞。

15.权利要求1的方法，其中宿主动物包含一个或多个辅助胚胎。

16.权利要求1的方法，其中分化细胞包含一处或多处当在人体内移植所述克隆胎儿或动物的细胞、组织、或器官时可抑制排斥的遗传修饰。

17.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核得自中胚层。

18.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核得自外胚层。

19.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核得自内胚层。

20.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核是成纤维细胞或细胞核。

21.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核是成熟的分化细胞或由其衍生的细胞核。

22.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核是胚胎或胎儿细胞或者细胞核。

23.权利要求1的方法，其中分化猪细胞或细胞核是直接得自猪的增殖中细胞。

24.权利要求1的方法，其中所述分化细胞或细胞核得自己在组织培养中扩增的增殖中细胞。

25.权利要求1的方法，其中在核移植前将所述分化细胞或细胞核在体内增殖。

26.权利要求25的方法，其中所述增殖猪细胞得自己注射猪细胞的SCID小鼠。

27.权利要求25的方法，其中所述增殖细胞经过遗传修饰。

28.权利要求27的方法，其中所述遗传修饰是使用重组病毒、病毒载体、裸露的DNA、或质粒载体进行的。

29.权利要求1的方法，其中使去核卵母细胞在去核前成熟。

30.权利要求1的方法，其中融合的核移植单位通过暴露于一次或多次电脉冲而得到激活。

31.权利要求1的方法，其中融合的核移植单位通过暴露于离子霉素和DMAP而得到激活。

32.权利要求1的方法，其中融合的核移植单位通过暴露于至少一种衍生自精细胞的激活因子而得到激活。

33.权利要求3的方法，其中将显微注射用于嵌入所述异源DNA。