[发明专利]疫苗组合物

权利要求书

1.来自革兰氏阴性细菌的基因工程改造的囊泡制剂，其特征在于所述的制剂通过利用选自一下的方法获得：

a)一种减少囊泡制剂中的免疫显性可变的或非保护性抗原的方法，包括以下步骤：确定此抗原的身份，工程改造一种细菌菌株来产生较少的或不产生所述的抗原，并且从所述菌株生产囊泡；

b)一种上调囊泡制剂中的保护性OMP抗原的表达的方法，包括以下步骤：鉴定所述的抗原，工程改造一种细菌菌株来导入强启动子序列到编码所述抗原的基因的上游使得所述基因以比在非修饰的囊泡中更高的水平表达，且从所述的菌株制备囊泡；

c)一种上调囊泡制剂中的条件化表达的保护性OMP抗原的表达的方法，包括以下步骤：鉴定所述的抗原，工程改造一种细菌菌株来去除其表达的抑制调控机制，且从所述的菌株制备囊泡；

d)一种修饰囊泡制剂中的细菌LPS的脂A部分的方法，包括以下步骤：鉴定与LPS类脂A部分的毒性有关的基因，工程改造一种细菌菌株来减少或关闭所述基因的表达，并从所述的菌株制备囊泡；

e)一种修饰囊泡制剂中的细菌LPS的脂A部分的方法，包括以下步骤：鉴定与使得LPS的类脂A部分毒性降低有关的基因，工程改造一种细菌菌株来导入强启动子序列到编码所述抗原的基因的上游使得所述基因以比在非修饰的囊泡中更高的水平表达，且从所述的菌株制备囊泡；

f)一种减少囊泡制剂中脂类A毒性和增加保护性抗原的水平的方法，包括以下步骤：工程改造细菌菌株的染色体来结合一个编码融合到保护性抗原上的多粘菌素A肽，或其衍生物或类似物的基因，并从所述的菌株制备囊泡；

g)一种在囊泡制剂中生成保守的OMP抗原的方法，包括以下步骤：鉴定所述的抗原，改造细菌菌株来缺失编码所述抗原的基因的可变区，并从所述的菌株制备囊泡；

2.权利要求1的基因工程改造的囊泡制剂，其中所述的制剂通过采用选自以下的一种或多种进一步的方法获得：

h)一种减少抗原在囊泡制剂中表达的方法，其中的抗原结构与人的结构类似且可以在人体中诱导自身免疫应答，包括以下步骤：鉴定涉及抗原的生物合成的基因，改造细菌菌株来减少或关闭所述基因的表达，并从所述的菌株制备囊泡；

i)一种上调囊泡制剂中保护性OMP抗原的表达的方法，包括以下步骤：鉴定所述的抗原，工程改造一种细菌菌株来导入编码所述由异源强启动子序列调控的抗原的基因的一或多个拷贝至染色体，并从所述的菌株制备囊泡。

3.权利要求1或2中的囊泡制剂，其中方法a)，b)，c)，d)，e)，h)和i)的工程改造步骤通过在细菌染色体的至少30个核苷酸的序列和转化菌株的载体上的至少30个核苷酸序列之间的同源重组事件来进行。

4.如权利要求3所述的囊泡制剂，其中的工程改造步骤通过细菌染色体上两个由核苷酸序列“X”分隔的至少30个核苷酸的序列和转化菌株的载体上两个由核苷酸序列“Y”分隔的至少30个核苷酸的序列之间的双重交叉互换同源重组事件来进行，其中在重组事件中，X和Y是相互交换的。

5.如权利要求4所述的囊泡制剂，其中的两个核苷酸序列为大约相同的长度，且其中的载体是线性的DNA分子。

6.如权利要求4或5所述的囊泡制剂，其中方法a)，b)，c)，d)，e)和h)的重组事件是在目的基因的起始密码子上游1000bp的染色体区进行。

7.如权利要求6所述的囊泡制剂，其中方法a)，d)或h)的核苷酸序列X含有基因的部分启动子区，且核苷酸序列Y含有弱启动子区，或无启动子区。

8.如权利要求6所述的囊泡制剂，其中方法b)或e)中的核苷酸序列Y含有细菌的强启动子区。

9.如权利要求8所述的囊泡制剂，其中的核苷酸序列Y插入在目的基因的起始密码子上游大约200-600bp。

10.如权利要求9所述的囊泡制剂，其中的核苷酸序列Y插入在目的基因的起始密码子上游大约400bp。

11.如权利要求6所述的囊泡制剂，其中方法c)中核苷酸序列X含有启动子的部分抑制调控区，且核苷酸序列Y不含这种序列。

12.如权利要求4或5所述的囊泡制剂，其中方法a)，d)和h)的重组事件被进行使得核苷酸序列X含有目的基因的部分编码序列。