[发明专利]新型生物活性糖蛋白

说明书

本发明涉及制备和技术生物化学并涉及生物活性化学组合物的获取。本发明能用于细胞生物学、医学和兽医学。

在先技术水平

糖蛋白为共轭蛋白，含有蛋白部分和有机或无机的非蛋白组分，其能共价、极性或配价地与多肽链和存在于水解产物中的氨基酸相连。糖蛋白的非朊基部分以中性糖(半乳糖、甘露糖和海藻糖)或氨基糖(N-乙酰葡糖胺或酸性单糖衍生物)为代表(H.-D.Jacubke，X.Ashkite《Amino acids，peptides，proteins》Moscow，Mir 1985，p.345)。

糖蛋白广泛分布于自然界中。血清的主要成分(免疫球蛋白和转铁蛋白等)、血液的基团物质、不同病毒(感冒病毒和麻疹病毒等)抗原、某些激素、凝集素和酶等都属于糖蛋白。

凝集素代表了一大组别的糖蛋白。它们分子的蛋白部分其特征是缺少丝氨酸和苏氨酸，而丝氨酸和苏氨酸负责将凝集素分子中的碳水化合物组分与多肽链相连。凝集素中碳水化合物的平均含量约为5％。碳水化合物的组成基本限定于半乳糖、甘露糖、海藻糖和N-乙酰葡糖胺(H.-D.Jacubke，X.Ashkite《Amino acids，peptides，proteins》Moscow，Mir 1985，p.428-429)。现有方法描述

从GB 2078229，1982中得知具有免疫抑制能力的糖蛋白。提取糖蛋白方法是将采自人类或温血动物的血清或腹水等电聚焦，接着用等电点(pI)在pH2.6-3.6间分级选择。该糖蛋白用于经受移植的病人以抑制异物反应。

专利GB 2095260，1982公开了一种生物活性物质——分子量为3000-5000的糖蛋白。其具有在同源和异源细胞中抑制弓形虫繁殖的能力。

从专利GB 2117385，1982中得知具有抗癌活性的糖蛋白。该糖蛋白的分子量为7000-90000；糖含量为8-45％，包括6-28％的己糖、1-11％的己糖胺和1-6％的唾液酸。其在pH2.0、7.0或11.0的水溶液中4℃稳定24小时或更多，在pH7.0的水溶液中60℃稳定3小时或更多。该糖蛋白选择性地影响癌细胞而不影响正常细胞。

从专利CH 634334，1983中得知免疫糖蛋白。其含有蛋白部分89±4％，碳水化合物部分11.1±2.2％，己糖5.3±1.1％，己糖胺的N-乙酰残基2.8±0.5％，神经氨糖酸的N-乙酰残基2.9±0.5％。该糖蛋白分子量为32000±6000；pI为4.3±0.3；沉降系数S_20n为3.2±0.3。

从专利RU 2136695，1999中得知分子量为12.5千道尔顿(kDa)的血清糖蛋白。其在低剂量时具有生物活性并含有大约50％的碳水化合物。等电点位于pH4.6-4.7间。

从专利EP 000134，1978中得知新糖蛋白。其含有α-氨基酸75±6％，碳水化合物部分24.6±5.2％，己聚糖2.9±2％，己糖胺的N-乙酰残基7.1±1.5％，海藻糖0.2±0.2％和神经氨糖酸的N-乙酰残基8.4±1.5％。该糖蛋白的分子量为65000±10000，pI为3.4±0.4。

从FVO和Ceneva P.falciparum中提取并研究了分子量为56kDa的同源糖蛋白。其等电点为pH5.5。该糖蛋白的碳水化合物部分含有N-乙酰半乳糖胺和甘露糖(专利US 4835259，分类号为C07K15/15，1989)。

与该发明最近的糖蛋白分子量为5-300kDa，等电点位于pH2.5-5.0间，蛋白和碳水化合物部分的重量比为50∶50-80∶20，碳水化合物部分含有海藻糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖和葡糖胺，蛋白部分含有天门冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、胱硫醚、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸(US 4683438，分类号为C07K15/14，1987)。

发明简述

因此，本发明涉及在超低剂量下具有生物活性的糖蛋白，其能用于医药工业中。

另一方面，本发明涉及在超低剂量下具有生物活性糖蛋白的提取方法和其作为医药制剂的应用。

因此，本发明的技术任务就是获取在超低剂量下具有生物活性的糖蛋白(10^-12-10^-29mol/L和更低)。