[发明专利]将二倍体转变成单倍体用于遗传诊断

权利要求书

1.用于检测非啮齿类哺乳动物目的基因中的突变的方法，包括下列步骤：

融合非啮齿类哺乳动物细胞与啮齿类细胞受者，以形成非啮齿类哺乳动物-啮齿类杂交细胞；

通过选择啮齿类染色体所含第一标记和第一非啮齿类哺乳动物染色体所含第二标记来选择融合后杂交细胞，以形成融合后杂交细胞群体；

在融合后杂交细胞群体中检测对于第二非啮齿类哺乳动物染色体而言是单倍体的杂交细胞亚群，所述第二非啮齿类哺乳动物染色体与第一非啮齿类哺乳动物染色体不是相同染色体，而且没有经过选择；

分析杂交细胞亚群以检测所述基因或其mRNA产物中的突变，其中该基因位于第二非啮齿类哺乳动物染色体上。

2.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞是二倍体。

3.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞受者是错配修复缺陷的。

4.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞受者是遗传霉素抗性的。

5.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞受者经癌基因转化。

6.权利要求5的方法，其中癌基因是ras。

7.权利要求5的方法，其中癌基因是E1A。

8.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞受者经ras和E1A癌基因转化。

9.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞受者是MSH2。

10.权利要求1的方法，其中啮齿类细胞受者是二倍体而且包含可选择标记和反选择标记。

11.权利要求10的方法，其中反选择标记是HPRT缺陷。

12.权利要求1的方法，其中还包括步骤：

在融合后杂交细胞群体中检测第三非啮齿类哺乳动物染色体，其中第一、第二、和第三非啮齿类哺乳动物染色体是不同的，而且第二和第三非啮齿类哺乳动物都没有经过选择。

13.权利要求1的方法，还包括步骤：

在融合后杂交细胞群体中检测第三和第四非啮齿类哺乳动物染色体，其中第一至第四非啮齿类哺乳动物染色体是不同的，而且第二至第四非啮齿类哺乳动物染色体都没有经过选择。

14.权利要求12的方法，其中还包括步骤：

测试所述杂交细胞亚群以检测第二基因的mRNA产物或所述第二基因的蛋白质产物，其中第二基因位于第三非啮齿类哺乳动物染色体上，其中来自所述第二基因的所述mRNA或蛋白质产物的量降低或所述mRNA或蛋白质产物的特性改变指示该非啮齿类哺乳动物的第二基因中存在突变。

15.权利要求13的方法，其中还包括步骤：

测试所述杂交细胞亚群以检测第二和第三基因的mRNA产物或所述第二和第三基因的蛋白质产物，其中第二和第三基因位于第三和第四非啮齿类哺乳动物染色体上，其中所述第三或第四基因的所述mRNA或蛋白质产物的量降低或者所述mRNA或蛋白质产物的特性改变指示该非啮齿类哺乳动物的第三或第四基因中存在突变。

16.权利要求1的方法，其中非啮齿类哺乳动物细胞是淋巴细胞。

17.权利要求1的方法，其中检测对于第二非啮齿类哺乳动物染色体而言是单倍体的杂交细胞亚群的步骤是通过鉴定第二非啮齿类哺乳动物染色体上的微卫星标记而实现的。

18.权利要求1的方法，其中分析以检测突变的步骤是通过选自下组的技术而进行的：核酸测序、等位基因特异性PCR、等位基因特异性杂交、微阵列杂交、不连续梯度凝胶电泳(DGGE)、和自动化核酸测序。