[发明专利]一种新的多肽——翻译起始因子辅助因子21.56和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——翻译起始因子辅助因子21.56，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

蛋白质的生物合成是遗传信息的翻译过程。翻译过程需要mRNA、核糖体、各种氨基酸、tRNA，还需要各种蛋白因子的参与，它们包括起始因子、延伸因子、终止因子。

eIF如eIF1、eIF2、eIF3、eIF4等为真核生物合成起始因子。实验显示，Met-tRNAI·eIF-2·GTP三元复合物的形成是真核生物蛋白合成起始过程的第一步，第二步是Met-tRNA_I与40S核糖体亚基结合，然后Met-tRNA_I·40S·mRNA复合物形成，以上两步骤受数种辅助蛋白因子调控(Gupta et al.1993；Hershey1991；Merrick and Hershey 1996)。在第一步中GTP结合eIF-2，形成二元复合物，然后与Met-tRNA_I ^met结合，GTP结合于eIF-2增强了eIF-2对Met-tRNA_I ^met的亲合性，辅助因子eIF2C可使三元复合物增强稳定性，阻止它的分解，在第二步中辅助因子eIF2C也起着稳定Met-tRNA_I·40S·mRNA复合物的作用(Roy etal.，1988)。

eIF2C首先在家兔网状细胞溶菌素中分离得到，分子量为140KD，它易降解，三个降解多肽为94KD、50KD与25KD。eIF2C基因开放读框序列解码813个氨基酸，它的起始AUG位于翻译的强信号序列(CGAGAUGG)中，在-3与+4位置含有嘌呤，在3’端的非编码区域末发现多聚腺苷酸。克隆的eIF2CcDNA总的GC含量占60％，比一些人翻译起始因子eIF-2α(GC 40％)、eIF-2β(GC 42％)、eIF-2γ(GC 43％)GC含量相对高。eIF2C基因开放读框序列解码多肽为90KD，其分子量与兔网状细胞溶菌素中的140KDeIF2C的差异提示了翻译后的修饰，用MOTIF查询程序发现了两个N-糖基化位点、两个酰胺化位点、八个N-十四烷酰化位点、多个磷酸化位点。兔网状细胞溶菌素中纯化的94KD多肽是一个糖基化蛋白，有高的等电点，富含带电氨基酸(Cheng zou et al.，1998)

本发明的人翻译起始因子辅助因子21.56基因与家兔eIF2C90基因在蛋白水平上有80％的同源性(翻译起始因子辅助因子号AF005355)，其结构域相似于eIF2C基因家族的特征性结构域---GC含量较高、存在翻译后的修饰、可能有数个N-糖基化位点、酰胺化位点、N-十四烷酰化位点及多个磷酸化位点，基于以上各点，故认为本发明的新基因为一编码人翻译起始因子辅助因子基因家族的基因，命名为人翻译起始因子辅助因子21.56。并以此推断其结构域与eIF2C基因家族结构域相似，具有相似的生物学功能。

在家兔肾cDNA也找到了eIF2C，提示eIF2C基因是兔染色体中的简单重复序列(Cheng zou et al.，1998)。一些研究显示类eIF2C的活性在真核生物组织中广泛存在，如鼠腹水瘤细胞、小麦胚芽、酵母等(Chakravarty et al.，1985；Dasgupta et al.，1978；Osterhout et al.，1983；Ahmad et al 1985)。Lynn K等人发现eIF2C在胚胎形成中有重要作用(Lynn K et al.，1999)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与翻译起始因子辅助因子的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为翻译起始因子辅助因子21.56。

由于如上所述翻译起始因子辅助因子21.56蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的翻译起始因子辅助因子21.56蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新翻译起始因子辅助因子21.56蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——翻译起始因子辅助因子21.56以及其片段、类似物和衍生物。