[发明专利]一种新的多肽——人凝血因子IX－10.34和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人凝血因子IX-10.34，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

凝血因子IX是一种维他命K依赖的质膜蛋白，在生物体内参与各受伤组织血液凝结过程中期的各种相关反应。其是一单链糖蛋白，作为血凝结过程中丝氨酸蛋白水解酶的酶原，参与各种相关的生理过程。当生物体内血管遭到外界损伤时，即会激活自身的凝血机制，以促进相关部位的血凝结及修复。该修复过程通常由凝血因子IX来参与完成，凝血因子IX作为一种丝氨酸蛋白水解酶，在有凝血因子VIII、钙离子及磷酸脂存在的条件下激活凝血因子X的作用活性，并与各因子协同作用促进血液凝结过程的完成。由此可知，凝血因子IX在生物体血液凝结过程中起着极为重要的作用，该蛋白的突变或表达异常将导致血液凝结过程的异常，即引发一些相关的血液系统疾病。

在各种不同的生物体内均含有凝血因子IX，且不同来源的凝血因子均具有较高的同源性，在进化上高度保守。所有不同来源的凝血因子IX的氨基末端均含有12个γ-羧基谷氨酸残基和一个β-羟基天冬氨酸残基。其中γ-羧基谷氨酸残基负责蛋白与钙离子的结合，以形成具有催化活性的构象，激活各相关因子的作用活性。进一步的研究发现，该蛋白因子定位于生物的X染色体长臂上，其可能与一些相关的伴性遗传类疾病的发生密切相关[Shinji Yoshitake，Barbara G.Schach et al.，1985，24：3736-3750]。

1983年，Chung等人即从人中克隆得到了一凝血因子IX，并发现该蛋白定位于人X染色体的长臂上，其在人体内参与调控相关受伤组织的血液凝结过程[Chung D.W.，Que B.G.et al.，1983，Biochemistry，22：3244-3250]。1984年，Shinji等人又从人体内克隆得到了另两个新的凝血因子IX，并发现两者与已知的凝血因子IX均有较高的同源性，且均在生物体内参与调控多种受伤组织的凝血过程。

由上可知，凝血因子IX是生物体受伤组织血液凝结过程中的一种重要的调控因子，其作为一种丝氨酸蛋白激酶，通过催化激活多种相关因子的作用来调控整个凝血过程的进行。研究发现，该蛋白因子与一些伴性遗传病，如christmas疾病等的发生密切相关，其核酸组成外显子7中的GT转变为TT，即是christmas疾病发生的主要原因[D.J.G.Rees，C.R.Rizza et al.，1985，Nature，316：643-645]。由此可知，该蛋白在生物体内参与多种组织损伤的修复过程，其突变或表达异常将导致相关组织凝血过程的异常，进而引发各种相关的疾病。该蛋白在生物体内通常与一些血液系统紊乱性疾病、相关组织的炎症反应、相关的伴性遗传性疾病如christmas病等疾病的发生密切相关。该蛋白还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人凝血因子IX的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人凝血因子IX-10.34。

由于如上所述人凝血因子IX-10.34蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人凝血因子IX-10.34蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人凝血因子IX-10.34蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人凝血因子IX-10.34以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人凝血因子IX-10.34的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人凝血因子IX-10.34的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人凝血因子IX-10.34的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人凝血因子IX-10.34的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人凝血因子IX-10.34的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人凝血因子IX-10.34异常相关的疾病的方法。