[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白28.71和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白28.71，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

锌指蛋白在生物活细胞中起着重要的作用，其中最重要的是作为转录调节因子发挥作用[Berg J.M.，Shi Y.et al.，Science，1996，271：1081-1085]。真核基因的转录调控对于基因的正常表达是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一调控过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。锌指蛋白对基因表达的调控主要通过与特定的DNA序列结合来完成，现在发现也有一些锌指蛋白可与RNA结合以调节RNA的代谢。锌指蛋白在生物体内的分别非常广泛，按其结构特征又可分为各种不同的亚家族，不同亚家族的成员在生物体内协同作用，以正确地调节不同基因地表达。

人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种不同类型的锌指蛋白。C2H2型锌指蛋白在生物体内基因的表达调节过程中起着十分重要的作用，该类型的锌指蛋白均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列：(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸残基位点为高度保守的。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同则功能也不同。[Jeremy M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

C2H2型锌指蛋白按其结构特征还可分成各种不同的家族。Kruppel型锌指蛋白在生物体内即形成了独立的家族，该家族的成员均含有锌指蛋白家族保守的锌指基序，且各基序间由保守的H/C连接区域连接在一起，该区域含有保守的氨基酸序列：TGEKPY/F[Schuh R.，Aicher W.Et al.，Cell，1986，47：1025-1032]。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，该家族中约有三分之一的成员在其N末端还含有一由75个氨基酸组成的保守基序，并将此基序命名为KRAB(Kruppel-associated box)结构域。该结构域为锌指蛋白N末端与DNA结合的结构域，在进化上高度保守[Judith F.Margolin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91：4509-4513]。该结构域又分为A、B两个盒结构，其中富含变化的氨基酸残基，形成两个亲水性螺旋。锌指蛋白KRAB亚家族中的成员有些同时含有KRAB A-盒及KRAB B-盒，而有些仅含KRAB A-盒。研究发现，KRAB结构域为一潜在的转录抑制结构域，其中KRAB A盒及KRAB B盒均具有转录抑制活性，但KRAB A盒的抑制活性较弱，而KRAB B盒具有强转录抑制活性。其中由45个氨基酸组成的亲水性螺旋片段为转录抑制所必须的，螺旋结构中氨基酸的替换将减弱蛋白对转录的抑制功能，从而导致基因转录表达的失调及引发各种发育及恶性紊乱相关的疾病[N.Tommerup et al.，Genomics，1995，27：259-264]。

1995年，Vissing等人从人中克隆得到了一锌指蛋白KRAB亚家族中的新成员ZNF136，该蛋白的蛋白序列中只含有保守的KRAB A结构域，其在人体的各种组织中均有表达，但在体内发挥较弱的转录抑制活性。其在体内主要负责参与调控多种相关基因的转录与表达，该蛋白的突变或表达异常将导致相关蛋白在体内的表达异常，进而引发各种相关的发育及代谢紊乱型疾病[Vissing H.，Meyer W.K.et al.，1995，FEBS Lett，369：153-157]。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人锌指蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人锌指蛋白28.71。

由于如上所述人锌指蛋白28.71蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白28.71蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白28.71蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。